Virucidné a antivírusové účinky esenciálneho oleja Tymiánu obyčajného na mačací koronavírus

22.4.2021
Cristiana Catella, Michele Camero, Maria Stella Lucente, Giuseppe Fracchiolla, Sabina Sblano, Maria Tempesta, Vito Martella, Canio Buonavoglia, Gianvito Lanave
Pôvodný článok: Virucidal and antiviral effects of Thymus vulgaris essential oil on feline coronavirus

Obsah skryť

Základné fakty

Abstrakt

Kľúčové slová

Výsledky

Prehlásenie o konflikte záujmov

Dodatok A. Doplňujúce údaje

Referencie

Základné fakty

EO fungujú ako antibakteriálne, antivírusové, protiplesňové a insekticídne látky.
TEO preukázal účinnosť proti niekoľkým RNA vírusom vrátane CoV.
Protiinfekčná aktivita TEO proti FCoV sa hodnotila v bunkách CRFK.
Ukázalo sa, že TEO inhibuje replikáciu FCoV in vitro.
TEO vykazoval virucidnú aktivitu proti FCoV až 92,86%.

Abstrakt

Mačací infekčný zápal pobrušnice (FIP) je smrteľné systémové ochorenie mačiek spôsobené koronavírusom (CoV) (FIPV). Napriek klinickému významu a vplyvu na zdravie mačiek sú v súčasnosti terapeutické možnosti liečby FIP u mačiek obmedzené. Výskyt pandemického koronavírusu ťažkého respiračného syndrómu typu 2 (SARS-CoV-2), etiologického agens koronavírusovej choroby z roku 2019 (COVID-19), schopného infikovať široké spektrum druhov zvierat vrátane mačiek, vyvolali záujem o vývoj nových molekúl s antivírusovou aktivitou na liečbu infekcií CoV u ľudí a zvierat.

Esenciálne oleje (EO) vzbudili významnú pozornosť svojimi antivírusovým vlastnosťami, ktoré integrujú a v niektorých prípadoch nahrádzajú bežné lieky. Je známe, že Thymus vulgaris EO (TEO) je účinný proti niekoľkým RNA vírusom vrátane CoV. V predloženej štúdii sa antivírusová účinnosť TEO proti FIPV hodnotila in vitro.

TEO v koncentrácii 27μg/ml bol schopný inhibovať replikáciu vírusu s významným znížením o 2 log₁₀ TCID₅₀/50 μl. Okrem toho bola virucidná aktivita testovaná pomocou TEO pri koncentrácii 27 a 270 μg/ml, nad cytotoxickým prahom, na stanovenie zníženia vírusového titra až na 3,25 log₁₀TCID₅₀/50 μl do 1 hodiny časového kontaktu. Tieto výsledky otvárajú niekoľko perspektív z hľadiska budúcich aplikácií a terapeutických možností pre koronavírusy, keďže FIPV infekcia u mačiek by mohla byť potenciálnym modelom pre štúdium antivirotík proti CoV.

Kľúčové slová

Tymianový éterický olej, Mačací koronavírus, Thymus vulgaris, Tymián obecný, Dúška tymianová, Materina dúška, Tymián obyčajný, FIP

Výsledky

Pandémia koronavírusovej choroby z roku 2019 (COVID-19) spôsobená koronavírusom ťažkého repiračného syndrómu (SARS-CoV-2) (WHO, 2020) podnietila výskum liečby a imunitnej profylaxie s využitím predošlých poznatky zhromaždených o SARS-CoV-1 a živočíšnych CoV (Decaro a kol., 2020). Doteraz nebol schválený žiadny konkrétny liek na liečbu pacientov s COVID-19. Remdesivir, inhibítor RNA-dependentnej RNA polymerázy (RdRp), však preukázal sľubné výsledky (Kabir a kol., 2020). Okrem toho v súčasnosti prebiehajú štúdie na vyhodnotenie účinnosti teikoplanínu a monoklonálnych a polyklonálnych protilátok proti SARS-CoV-2 (Kabir a kol., 2020).

Lieky skúmané u mačiek na liečbu mačacej infekčnej peritonitídy (FIP) boli tiež testované proti COVID-19 u ľudských pacientov (Pedersen a kol., 2018, Pedersen a kol., 2019).

Koronavírusy sú dlho známe práve kvôli existencii FIP, smrteľného systémové ochorenia mačiek. Vírus FIP (FIPV) je virulentný patotyp mačacieho enterického koronavírusu (FCoV) (Kummrow a kol., 2005). Napriek jeho vplyvu na zdravie mačiek sú terapeutické možnosti liečby FIP u mačiek obmedzené a účinné vakcíny nie sú k dispozícii. Okrem toho boli hlásené nepriaznivé účinky vakcín (Tizard, 2020). Vývoj nových molekúl s antivírusovou aktivitou na liečbu infekcií CoV je v súčasnosti vnímaný ako priorita v humánnej aj v živočíšnej medicíne. Infekcia FIPV u mačiek sa považuje za potenciálny model pre štúdium antivirotík proti CoV (Amirian a Levy, 2020).

Rastlinné lieky podnietili záujem spotrebiteľov i vedcov (Hosseinzadeh a kol., 2015) a éterické oleje (EO) extrahované z aromatických a liečivých rastlín zvýšili osobitnú pozornosť pre ich prospešné vlastnosti (de Sousa Barros a kol., 2015). Uvádza sa, že EO vykazujú významné antiseptické, antibakteriálne, antivírusové, antioxidačné, antiparazitárne, protiplesňové a insekticídne účinky (Chouhan a kol., 2017; Ma a Yao, 2020). Nedávno u sumcov experimentálne intoxikovaných Thiamethoxamom (TMX) podávanie EO Thymus vulgaris (TEO) čiastočne znížilo toxické účinky TMX (El Euony a kol., 2020). EO sú tiež potenciálnym rezervoárom inovatívnych terapeutických riešení, ktoré integrujú a v niektorých prípadoch nahrádzajú konvenčné lieky (Reichling a kol., 2009). Napríklad EO Laurus nobilis (Vavrín pravý – Vavřín vznešený) inhiboval SARS CoV typu 1 (SARS-CoV-1) (Loizzo a kol., 2008) a zmes EO bola účinná proti vírusu vtáčej koronavírusovej infekčnej bronchitídy (IBV) (Jackwood et al., 2010). ). Nedávno sa tiež ukázalo, že EO vykazujú antivírusovú aktivitu proti SARS-CoV-2 (Asif a kol., 2020). Ukázalo sa, že TEO je účinný proti niekoľkým RNA vírusom vrátane CoV (Lelešius a kol., 2019; Nadi a kol., 2020).

Zloženie TEO (Specchiasol Bussolengo, Verona – Taliansko) sa stanovilo v troch nezávislých experimentoch pomocou plynovej chromatografie technikou hmotnostnej spektrometrie (GC-MS) (Rosato a kol., 2020). Podrobnosti o príprave vzoriek, prístrojoch a metódach analýzy GC-MS už boli publikované (Salvagno a kol., 2020; Rosato a kol., 2018). Dáta z GC/MS analýz boli vyjadrené ako % plochy ± Modelovanie štruktúrnych rovníc (SEM). Vo všetkých prípadoch bol SEM nižší ako 10%. Štatistická analýza pre SEM bola vykonaná pomocou programu Microsoft Excel Office 2010 (Windows 7 Home Premium, Microsoft Corporation, USA). Celkovo bolo vo vzorke TEO identifikovaných 26 zložiek, čo zodpovedá 98,7% celej zmesi. Podrobné chemické zloženie TEO je uvedené v doplnkovej tabuľke 1.

TEO v koncentrácii 928 mg/ml sa najskôr zriedil v dimetylsulfoxide (DMSO; Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) a následne v Dulbecco-MEM (D-MEM).

Mačacie obličkove bunky Crandell Reese (CRFK) sa kultivovali v DMEM a kmeni FCoV-II 25/92 (Buonavoglia a kol., 1995) s titrom 10^5.25 TCID₅₀/50 μl.

Cytotoxicita TEO sa hodnotila pomocou testu XTT (Denizot a Lang, 1986) s použitím súpravy In Vitro Toxicology Assay Kit (Sigma – Aldrich Srl, Miláno, Taliansko) po vystavení buniek rôznym koncentráciám zlúčenín (7.25, 14.5, 29, 58, 116, 232, 464, 928, 1856 μg/ml) počas 72 hodín. Cytotoxicita sa vyhodnocovala spektrofotometrickým meraním absorpčného signálu (optická hustota, OD). Vo všetkých experimentoch boli neošetrené bunky použité ako negatívna kontrola pri 0% cytotoxicite. Ako kontrola vehikula sa použili bunky ošetrené ekvivalentnými riedeniami DMSO. Po logaritmickej konverzii koncentrácií TEO sa údaje získané v testoch cytotoxicity analyzovali pomocou postupu nelineárnej úpravy krivky. Správnosť zhody sa testovala nelineárnou regresnou analýzou krivky dávka-odozva. Maximálna necytotoxická koncentrácia sa považovala za koncentráciu zlúčeniny, pri ktorej životaschopnosť ošetrených buniek CRFK poklesla o nie viac ako 20% (CC₂₀) vzhľadom na negatívnu kontrolu.

Hodnota CC₂₀ TEO bola vyhodnocovaná pri 27μg/ml a vypočítaná na základe priemeru ± štandardná odchýlka (SD) z troch experimentov. Vo všetkých experimentoch DMSO nepreukázal žiadny účinok na bunky.

Na základe výsledkov testu cytotoxicity sa antivírusová aktivita TEO proti kmeňu FCoV-II 25/92 vyhodnocovala pri 27μg/ml a tiež pod cytotoxickým prahom (13,5 μg/ml). Použitie látky pod cytotoxickým prahom nám umožňuje znížiť toxicitu a dosiahnuť efektívne výsledky pri nižších nákladoch. Konfluentné monovrstvy CRFK buniek 24h na 24-jamkových platniach boli infikované 100µl FCoV-II obsahujúceho 10000 TCID₅₀ s multiplicitou infekcie (MOI) 0,14. Po adsorpcii vírusu počas 1 hodiny pri 37°C sa očkovacie látky odstránili, bunkové monovrstvy sa raz premyli a pridal sa TEO. V neošetrených infikovaných bunkách sa použil D-MEM na nahradenie inokula a použil sa ako vírusová kontrola. Po 72 hodinách sa odobrali alikvóty supernatantov na vírusovú titráciu (Lanave a kol., 2019) a kvantifikáciu RNA (Gut a kol., 1999).

Virucidná aktivita TEO proti FCoV-II sa hodnotila predbežnou liečbou vírusu (10000 TCID₅₀) pomocou TEO v koncentrácii 27μg/ml a nad cytotoxickým prahom (270μg/ml), pretože ak sa použije ako virucid, molekula nie je v priamom kontakte s bunkami. Konkrétne bolo 100µl FCoV-II ošetrených TEO (1 ml) pri izbovej teplote. Na experimenty sa použila vírusová kontrola. Po 10 minútach, 30 minútach a 1 hodine sa alikvotné podiely každej zmesi vírusu-TEO a vírusovej kontroly podrobili vírusovej titrácii (Lanave et al., 2019).

Údaje z testov antivírusovej a virucidnej aktivity boli vyjadrené ako priemer ± SD a analyzované analýzou odchýlky (ANOVA) pomocou Tukeyho testu ako post hoc testu (štatistická významnosť stanovená na 0,05).

Štatistické analýzy sa uskutočňovali pomocou softvéru GraphPad Prism v.8.0.0 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA).

Vírusové titre infikovaných buniek CRFK ošetrených TEO a neošetrených infikovaných buniek (vírusová kontrola) sa vyjadrili ako log10 TCID50/50 ul a vyniesli sa proti koncentráciám liečiva. Porovnaním vírusového titra neošetrených infikovaných buniek (4,25 log₁₀ TCID₅₀/50 μl) s infikovanými bunkami ošetrenými TEO v koncentrácii 13,5 a 27μg/ml došlo k poklesu o 0,25 (p> 0,05) a 2,25 log10 TCID₅₀/50 μl (p < 0,0001), v danom poradí (obr. 1A). To naznačuje, že TEO v koncentrácii 27μg/ml je schopný významne inhibovať replikáciu vírusu. Antivírusová aktivita TEO proti FIPV korešponduje s výsledkami získanými s hydrosolmi Thymus vulgaris in vitro proti vírusu reprodukčného a respiračného syndrómu ošípaných (PRRSV) (Kaewprom a kol., 2017).

**Obrázok 1.** Vírusové titre supernatantov odobratých 72 hodín po infekcii z neošetrených CRFK buniek infikovaných FCoV (10 TCID₅₀) a ošetrených éterickým olejom Thymus vulgaris (TEO) v rôznych koncentráciách (13,5 a 27μg/ml). 0=Neošetrené CRFK bunky infikovanée FCoV, NA=Nukleová kyselina

Vírusové titre sa hodnotili metódou zriedenia endpointu, vyjadrili sa ako log₁₀ TCID₅₀/50 μl a vyniesli sa proti TEO pri rôznych koncentráciách (A). Vírusové nukleové kyseliny boli kvantifikované pomocou qPCR, vyjadrené ako log₁₀ vírusových NA/10ul a vynesené proti TEO pri rôznych koncentráciách (B). Pruhy na obrázkoch označujú priemery. Chybové pruhy označujú štandardnú odchýlku.

Vírusové nukleové kyseliny (NA) sa vyjadrili ako log₁₀vírusových NA/10μl infikovaných buniek ošetrených TEO a vírusovou kontrolou a vyniesli sa proti necytotoxickým koncentráciám liečia. Porovnaním vírusovej nálože neošetrených infikovaných buniek (6,53 log₁₀ vírusových NA/10μl) s infikovanými bunkami ošetrenými TEO pri 13,5 a 27 μg/ml bol zaznamenaný pokles o 0,61 (p = 0,0005) a 1,34 (p <0,0001) log10 NAs /10 μl, v danom poradí (obrázok 1B).

Virucidná aktivita TEO bola vyhodnocovaná pri rôznych koncentráciách a pre rôzne doby kontaktu s FCoV-II (obr. 2). Po 10 minútach TEO pri 27 a 270μg/ml sa zistilo zníženie o 1,5 (p = 0,0008) a 2,5 (p <0,0001) log₁₀TCID₅₀/50μl v porovnaní s vírusovou kontrolou (4,25 log₁₀ TCID₅₀/50 μl) (Obr. 2A). Po 30 minútach TEO pri 27 a 270 μg/ml indukoval pokles o 1,25 (p = 0,0007) a 3,375 (p <0,0001) log₁₀ TCID₅₀/50 μl v porovnaní s vírusovou kontrolou (3,75 log₁₀ TCID₅₀/50 μl) (Obr. 2B). Po 1 hodine TEO pri 27 a 270μg/ml došlo k poklesu o 1,25 (p = 0,0007) a 3,25 (p <0,0001) log₁₀ TCID₅₀/50μl v porovnaní s vírusovou kontrolou (3,50 log₁₀ TCID₅₀/50μl). K vírusovej inaktivácii došlo v závislosti na dávke a čase, počínajúc od 33,33% a dosahujúcou 92,86%, keď sa TEO použil v najvyššej koncentrácii (270 μg/ml), po 1 hodine (obr. 2C). Virucidnú aktivitu TEO možno vysvetliť schopnosťou poškodiť vírusový obal, čím sa zabráni adsorpcii a penetrácii do hostiteľských buniek (Reichling a akol., 2009), ako ukázala elektrónová mikroskopia u obalu herpesvírusu po predbežnej liečbe EO (Shogan a kol., 2006). TEO by preto mohol byť cenným prostriedkom na dezinfekciu povrchov a mohol by byť prísadou pri príprave potravinových výrobkov.

**Obrázok 2**. Virucidný účinok TEO pri rôznych koncentráciách (27 a 270 μg/ml) proti FCoV (10000 TCID₅₀). Vírus bol inkubovaný s TEO počas 10 minút (A), 30 minút (B) a 60 minút (C) pri izbovej teplote a následne titrovaný v CRFK bunkách. Vírusové titre FCoV boli vyjadrené ako log₁₀TCID₅₀/50 μl a vynesené proti TEO pri rôznych koncentráciách. Pruhy na obrázkoch označujú priemery. Chybové pruhy označujú štandardnú odchýlku.

Thymus vulgaris je aromatická rastlina stredomorského pôvodu, ktorá obsahuje EO a lipofilné látky (Nabavi a kol., 2015) a jej extrakty sú bohaté na tymol, karvakrol, p-cymén a γ-terpinén (Kowalczyk a kol., 2020).

Thymus vulgaris preukázal antivírusovú aktivitu proti herpes simplex vírusu (HSV) (Nolkemper a kol., 2006), chrípkovému vírusu (Vimalanathan a Hudson, 2014), vírusu Newcastleskej choroy (Rezatofighi a kol., 2014), PRRSV (Kaewprom a kol., 2017) a IBV (Lelešius a kol., 2019), aj keď antivírusový mechanizmus ešte treba objasniť. Naopak, bola už objasnená inhibícia replikácie vírusu ľudskej imunodeficiencie in vitro pomocou TEO (Feriotto a kol., 2018).

Chemické zloženie TEO odhalilo prítomnosť 26 molekúl, z ktorých hlavnými frakciami boli tymol, p-cymén, γ-terpinén, β-linalool, karyofylén. Aby sa znížila cytotoxicita TEO, bolo by zaujímavé identifikovať aktívne molekuly a testovať ich jednotlivo. Ako sa dalo očakávať, hlavnú zložku TEO použitú v tejto štúdii predstavoval tymol. Dokázalo sa, že tymolová frakcia má účinnosť proti HSV (Sharifi-Rad a kol., 2017) a chrípkovým vírusom (Alburn a kol., 1972). Mali by sa testovať ďalšie menej zastúpené frakcie TEO, aby sa vyhodnotila ich antivírusová aktivita.

Demonštrovali sme in vitro antivírusový a virucidný účinok TEO proti FCoV v bunkách CRFK. Tieto štúdie otvárajú niekoľko perspektív z hľadiska budúcich aplikácií a terapeutických možností pre ľudské a zvieracie koronavírusy.

Prehlásenie o konflikte záujmov

Autori prehlasujú, že nedošlo ku konfliktu záujmov.

Dodatok A. Doplňujúce údaje

Tabuľka 1: Chemické zloženie éterického oleja Thymus vulgaris

Číslo	Zložka	Area%+SEM	SI/MS	LRI	AI
1	propanoic acid, ethyl ester	0.10+0.09	86	714	714
2	α-tricyclene	0.13+0.10	94	915	919
3	α-thujene	1.21+0.98	97	925	926
4	α-pinene	1.81+0.11	95	930	931
5	camphene	1.89+0.70	96	949	952
6	1-octen-3-ol	0.37+0.01	83	974	975
7	sabinene	0.71+0.32	93	977	977
8	β-pinene	0.56+0.03	94	978	978
9	β-myrcene	1.42+0.25	86	985	991
10	α-phellandrene	0.15+0.01	91	1001	1003
11	p-cymene	19.64+2.50	95	1024	1024
12	limonene	0.6+0.01	91	1033	1027
13	eucalyptol	0.89+0.07	99	1023	1031
14	cis-β-terpineol	0.13+0.01	90	1145	1147
15	γ-terpinene	8.83+0.87	94	1063	1059
16	α-terpinolene	0.12+0.01	81	1085	1089
17	β-linalool	4.07+1.55	97	1097	1098
18	camphor	1.69+0.77	98	1145	1146
19	borneol	1.85+0.98	97	1166	1167
20	terpinen-4-ol	1.83+0.89	96	1172	1174
21	α-terpineol	0.12+0.01	86	1189	1190
22	methyl thymol, ether	0.39+0.22	90	1235	1235
23	isothymol methyl ether	0.42+0.02	94	NA	1244
24	thymol	47.01+1.59	94	1290	1290
25	caryophyllene	2.18+0.99	99	1417	1418
26	caryophyllene oxide	0.58+0.13	91	1581	1592
	Celkom charakterizované	98.7
	Ostatné	1.3

Legenda
SEM= Structural Equation Modeling (Modelovanie štrukturálnych rovníc)
SI/MS= Similarity Index/Mass Spectrum (Index podobnosti / hmotnostné spektrum)
LRI=Linear retention index (Lineárny retenčný index)
AI= Arithmetic Index (Aritmetický index)
NA=not assessed (neposudzované)

Referencie

Alburn et al., 1972: H.E. Alburn, W. Chester, G. Greenspan
Thymol as an Anti-Influenza Agent
(1972)
U.S. Patent 3,632,782
Google Scholar
Amirian and Levy, 2020: E.S. Amirian, J.K. Levy
Current knowledge about the antivirals remdesivir (GS-5734) and GS-441524 as therapeutic options for coronaviruses
One Health, 9 (2020), p. 100128, 10.1016/j.onehlt.2020.100128
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
Asif et al., 2020: M. Asif, M. Saleem, M. Saadullah, H.S. Yaseen, R. Al Zarzour
COVID-19 and therapy with essential oils having antiviral, anti-inflammatory, and immunomodulatory properties
Inflammopharmacology, 28 (2020), pp. 1153-1161, 10.1007/s10787-020-00744-0
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Buonavoglia et al., 1995: C. Buonavoglia, P. Sagazio, F. Cirone, M. Tempesta, F. Marsilio
Isolamento e caratterizzazione di uno stipite di virus della peritonite infettiva felina [Isolation and characterization of a feline infectious peritonitis strain]
Veterinaria, 9 (1995), pp. 91-93
Google Scholar
Chouhan et al., 2017: S. Chouhan, K. Sharma, S. Guleria
Antimicrobial activity of some essential oils-present status and future perspectives
Medicines (Basel)., 4 (2017), p. 58, 10.3390/medicines4030058
View Record in Scopus Google Scholar
Decaro et al., 2020: N. Decaro, V. Martella, L.J. Saif, C. Buonavoglia
COVID-19 from veterinary medicine and one health perspectives: what animal coronaviruses have taught us
Res. Vet. Sci., 131 (2020), pp. 21-23, 10.1016/j.rvsc.2020.04.009
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
Denizot and Lang, 1986: F. Denizot, R. Lang
Rapid colorimetric assay for cell growth and survival. Modifications to the tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability
J. Immunol. Methods, 89 (1986), pp. 271-277, 10.1016/0022-1759(86)90368-6
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
El Euony et al., 2020: O.I. El Euony, S.S. Elblehi, H.M. Abdel-Latif, M.M. Abdel-Daim, Y.S. El-Sayed
Modulatory role of dietary Thymus vulgaris essential oil and Bacillus subtilis against thiamethoxam-induced hepatorenal damage, oxidative stress, and immunotoxicity in African catfish (Clarias garipenus)
Environ. Sci. Pollut. Res. Int., 27 (2020), pp. 23108-23128, 10.1007/s11356-020-08588-5
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Feriotto et al., 2018: G. Feriotto, N. Marchetti, V. Costa, S. Beninati, F. Tagliati, C. Mischiati
Chemical composition of essential oils from Thymus vulgaris, Cymbopogon citratus, and Rosmarinus officinalis, and their effects on the HIV-1 Tat protein function
Chem. Biodivers., 15 (2018), p. 2, 10.1002/cbdv.201700436
Google Scholar
Gut et al., 1999: M. Gut, C.M. Leutenegger, J.B. Huder, N.C. Pedersen, H. Lutz
One-tube fluorogenic reverse transcription-polymerase chain reaction for the quantitation of feline coronaviruses
J. Virol. Methods, 77 (1999), pp. 37-46
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
Hosseinzadeh et al., 2015: S. Hosseinzadeh, A. Jafarikukhdan, A. Hosseini, R. Armand
The application of medicinal plants in traditional and modern medicine: A review of Thymus vulgaris
Int. J. Clin. Med., 6 (2015), pp. 635-642
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Jackwood et al., 2010: M.W. Jackwood, R. Rosenbloom, M. Petteruti, D.A. Hilt, A.W. McCall, S.M. Williams
Avian coronavirus infectious bronchitis virus susceptibility to botanical oleoresins and essential oils in vitro and in vivo
Virus Res., 149 (2010), pp. 86-94, 10.1016/j.virusres.2010.01.006
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
Kabir et al., 2020: M.T. Kabir, M.S. Uddin, M.F. Hossain, J.A. Abdulhakim, M.A. Alam, G.M. Ashraf, S.G. Bungau, M.N. Bin-Jumah, M.M. Abdel-Daim, L. Aleya
nCOVID-19 pandemic: from molecular pathogenesis to potential investigational therapeutics
Front. Cell Dev. Biol., 10 (2020), p. 616, 10.3389/fcell.2020.00616
View Record in Scopus Google Scholar
Kaewprom et al., 2017: K. Kaewprom, Y.H. Chen, C.F. Lin, M.T. Chiou, C.N. Lin
Antiviral activity of Thymus vulgaris and Nepeta cataria hydrosols against porcine reproductive and respiratory syndrome virus
Thai. J. Vet. Med., 47 (2017), pp. 25-33
View Record in Scopus Google Scholar
Kowalczyk et al., 2020: A. Kowalczyk, M. Przychodna, S. Sopata, A. Bodalska, I. Fecka
Thymol and thyme essential oil-new insights into selected therapeutic applications
Molecules, 9 (2020), p. 4125, 10.3390/molecules25184125
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Kummrow et al., 2005: M. Kummrow, M.L. Meli, M. Haessig, E. Goenczi, A. Poland, N.C. Pedersen, R. Hofmann-Lehmann, H. Lutz
Feline coronavirus serotypes 1 and 2: seroprevalence and association with disease in Switzerland
Clin. Diagn. Lab. Immunol., 12 (2005), pp. 1209-1215, 10.1128/CDLI.12.10.1209-1215.2005
View Record in Scopus Google Scholar
Lanave et al., 2019: G. Lanave, M.S. Lucente, P. Siciliano, C. Zizzadoro, P. Trerotoli, V. Martella, C. Buonavoglia, M. Tempesta, M. Camero
Antiviral activity of PHA767491 on caprine alphaherpesvirus 1 in vitro
Res. Vet. Sci., 126 (2019), pp. 113-117, 10.1016/j.rvsc.2019.08.019
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
Lelešius et al., 2019: R. Lelešius, A. Karpovaitė, R. Mickienė, T. Drevinskas, N. Tiso, O. Ragažinskienė, L. Kubilienė, A. Maruška, A. Šalomskas
In vitro antiviral activity of fifteen plant extracts against avian infectious bronchitis virus
BMC Vet. Res., 29 (2019), p. 178, 10.1186/s12917-019-1925-6
View Record in Scopus Google Scholar
Loizzo et al., 2008: M.R. Loizzo, A.M. Saab, R. Tundis, G.A. Statti, F. Menichini, I. Lampronti, R. Gambari, J. Cinatl, H.W. Doerr
Phytochemical analysis and in vitro antiviral activities of the essential oils of seven Lebanon species
Chem. Biodivers., 5 (2008), pp. 461-470, 10.1002/cbdv.200890045
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Ma and Yao, 2020: L. Ma, L. Yao
Antiviral effects of plant-derived essential oils and their components: an updated review
Molecules, 5 (2020), p. 2627, 10.3390/molecules25112627
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Nabavi et al., 2015: S.M. Nabavi, A. Marchese, M. Izadi, V. Curti, M. Daglia, S.F. Nabavi
Plants belonging to the genus Thymus as antibacterial agents: from farm to pharmacy
Food Chem., 173 (2015), pp. 339-347
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
Nadi et al., 2020: A. Nadi, A. Abbas Shiravi, Z. Mohammadi, A. Aslani, M. Zeinalian
Thymus vulgaris, a natural pharmacy against COVID-19 and other similar infections: a molecular review
Zenodo (2020), 10.5281/zenodo.3841889
Google Scholar
Nolkemper et al., 2006: S. Nolkemper, J. Reichling, F.C. Stintzing, R. Carle, P. Schnitzler
Antiviral effect of aqueous extracts from species of the Lamiaceae family against Herpes simplex virus type 1 and type 2 in vitro
Planta Med., 72 (2006), pp. 1378-1382, 10.1055/s-2006-951719
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Pedersen et al., 2018: N.C. Pedersen, Y. Kim, H. Liu, A.C. Galasiti Kankanamalage, C. Eckstrand, W.C. Groutas, M. Bannasch, J.M. Meadows, K.O. Chang
Efficacy of a 3C-like protease inhibitor in treating various forms of acquired feline infectious peritonitis
J. Feline Med. Surg., 20 (2018), pp. 378-392, 10.1177/1098612X17729626
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Pedersen et al., 2019: N.C. Pedersen, M. Perron, M. Bannasch, E. Montgomery, E. Murakami, M. Liepnieks, H. Liu
Efficacy and safety of the nucleoside analog GS-441524 for treatment of cats with naturally occurring feline infectious peritonitis
J. Feline Med. Surg., 21 (2019), pp. 271-281, 10.1177/1098612X19825701
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Reichling et al., 2009: J. Reichling, P. Schnitzler, U. Suschke, R. Saller
Essential oils of aromatic plants with antibacterial, antifungal, antiviral, and cytotoxic properties–an overview
Forsch Komplementmed, 16 (2009), pp. 79-90, 10.1159/000207196
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Rezatofighi et al., 2014: S.E. Rezatofighi, A. Seydabadi, S.M. Seyyed Nejad
Evaluating the efficacy of Achillea millefolium and Thymus vulgaris extracts against newcastle disease virus in ovo
Jundishapur J. Microbiol., 7 (2014), Article e9016, 10.5812/jjm.9016
View Record in Scopus Google Scholar
Rosato et al., 2018: A. Rosato, A. Carocci, A. Catalano, M.L. Clodoveo, C. Franchini, F. Corbo, G.G. Carbonara, A. Carrieri, G. Fracchiolla
Elucidation of the synergistic action of Mentha Piperita essential oil with common antimicrobials
PLoS One, 13 (2018), Article e0200902, 10.1371/journal.pone.0200902
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Rosato et al., 2020: A. Rosato, S. Sblano, L. Salvagno, A. Carocci, M.L. Clodoveo, F. Corbo, G. Fracchiolla
Anti-biofilm inhibitory synergistic effects of combinations of essential oils and antibiotics
Antibiotics (Basel), 9 (2020), p. 637, 10.3390/antibiotics9100637
CrossRef Google Scholar
Salvagno et al., 2020: G.L. Salvagno, E. Danese, G. Lippi
Mass spectrometry and total laboratory automation: opportunities and drawbacks
Clin. Chem. Lab. Med., 58 (2020), pp. 994-1001, 10.1515/cclm-2019-0723
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Sharifi-Rad et al., 2017: J. Sharifi-Rad, B. Salehi, P. Schnitzler, S.A. Ayatollahi, F. Kobarfard, M. Fathi, M. Eisazadeh, M. Sharifi-Rad
Susceptibility of herpes simplex virus type 1 to monoterpenes thymol, carvacrol, p-cymene and essential oils of Sinapis arvensis L., Lallemantia royleana Benth. and Pulicaria vulgaris Gaertn
Cell Mol. Biol. (Noisy-le-grand), 30 (2017), pp. 42-47, 10.14715/cmb/2017.63.8.10
CrossRef View Record in Scopus Google Scholar
Shogan et al., 2006: B. Shogan, L. Kruse, G.B. Mulamba, A. Hu, D.M. Coen
Virucidal activity of a GT rich oligonucleotide against herpes simplex virus mediated by glycoprotein B
J. Virol., 80 (2006), pp. 4740-4747
View Record in Scopus Google Scholar
de Sousa Barros et al., 2015: A. de Sousa Barros, S.M. de Morais, P.A.T. Ferreira, Í.G.P. Vieira, A.A. Craveiro, R.O. dos Santos Fontenelle, J.E.S.A. de Menezes, F.W.F. da Silva, H.A. de Sousa
Chemical composition and functional properties of essential oils from Mentha species
Ind. Crop. Prod., 76 (2015), pp. 557-564, 10.1016/j.indcrop.2015.07.004
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
Tizard, 2020: I.R. Tizard
Vaccination against coronaviruses in domestic animals
Vaccine, 38 (2020), pp. 5123-5130, 10.1016/j.vaccine.2020.06.026
Article Download PDF View Record in Scopus Google Scholar
Vimalanathan and Hudson, 2014: S. Vimalanathan, J. Hudson
Anti-influenza virus activity of essential oils and vapors
Am. J. Essent Oil, 2 (2014), pp. 47-53
View Record in Scopus Google Scholar
World Health Organisation (WHO), 2020: World Health Organisation (WHO)
Coronavirus Disease (COVID-19) Pandemic
https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019 (2020)
Google Scholar