Sérum je tekutá časť krvi, z ktorej boli odstránené červené krvinky, biele krvinky a faktory súvisiace so zrážaním krvi. Sérum obsahuje veľké množstvo bielkovín, ktoré plnia rôzne funkcie. Medzi tieto funkcie patrí zabezpečenie bunkovej výživy, ochrana pred infekciami, úloha pri zápaloch a pôsobenie ako hormóny alebo enzýmy.
Elektroforéza bielkovín je špecializovaný test, ktorý analyzuje konkrétne skupiny bielkovín v krvnom sére a meria zastúpenie každej skupiny bielkovín. Jednotlivé proteíny majú charakteristické veľkosti a elektrické náboje. Elektroforéza rozdeľuje sérové proteíny do širokých skupín na základe ich veľkosti a elektrického náboja. Výsledky analýzy sú zobrazené na špeciálnom grafe a vzor rôznych proteínov sa používa na diagnostiku konkrétnych chorôb vrátane niektorých typov rakoviny.
Aké proteíny meria test?
„Hladiny globulínu … majú tendenciu stúpať v prípade chorôb.“
V krvi je mnoho rôznych bielkovín, ale elektroforéza bielkovín sa zameriava iba na dve triedy bielkovín, nazývané albumín a globulín. Existuje iba jeden druh albumínu a nachádza sa v krvi v relatívne konštantných hladinách; je to všestranný proteín s radom dôležitých úloh, vrátane transportu látok v organizme. Naproti tomu existuje mnoho typov globulínov, z ktorých každý má špecifickú funkciu. Úrovne globulínov sú variabilnejšie ako albumín a v prípade ochorenia majú tendenciu stúpať.
Keď sa vzorka krvi analyzuje rutinnými metódami, zmerajú sa hladiny albumínu a celkového globulínu. Elektroforéza bielkovín ide ďalej a rozdeľuje celkový globulín na jeho jednotlivé časti, nazývané globulínové frakcie, ktoré sa potom merajú jednotlivo. Analýzou typov a množstiev rôznych bielkovín v krvi je často možné určiť povahu ochorenia vášho domáceho maznáčika.
Typicky sa globulíny rozdeľujú na tieto frakcie: α1 (Alfa 1), α2 (Alfa 2), β1 (Beta 1), β2 (Beta 2), γ (Gama)
Prečo sú globulíny dôležité?
Globulíny hrajú dôležitú úlohu v obrannom systéme tela; niektoré sú „prví záchranári“, ako hasiči, a rýchlo sa objavia v krvnom obehu po akomkoľvek poranení tkaniva. Ostatné, nazývané protilátky, sú produkované lymfoidnými bunkami, typom bielych krviniek, a objavujú sa v krvnom obehu pomalšie po poranení. Protilátky sú nevyhnutné pre schopnosť tela brániť sa pred napadnutím baktériami a inými organizmami spôsobujúcimi choroby.
Vysoká celková hladina globulínu v krvi vo väčšine prípadov naznačuje základný zápal alebo infekčné ochorenie, niekedy však naznačuje prítomnosť rakoviny, najmä postihujúcej lymfoidné bunky. Pri určovaní typu a distribúcie globulínov nám elektroforéza bielkovín môže pomôcť rozhodnúť, o aký druh ochorenia sa môže jednať.
Ako test funguje?
Elektroforéza belkovín je ako triedenie misky pomiešaných farebných guľôčok do oddelených skupín podľa farby a veľkosti a potom počítať, koľko guľôčok je v každej skupine. Základom testu je skutočnosť, že albumín a rôzne globulíny majú rôznu veľkosť a že každý typ proteínu nesie iný elektrický náboj, ako statickú elektrinu. Vzorka séra sa pripraví a umiestni na špeciálnu mriežku. Keď je aplikovaný elektrický prúd, rôzne proteíny migrujú po mriežke rôznymi rýchlosťami, čo spôsobuje, že sa rozdelia do skupín podľa veľkosti a elektrického náboja. Napríklad albumín je pomerne malá molekula a nesie veľa „statickej elektriny“; cestuje najďalej a najrýchlejšie zo všetkých bielkovín a je vždy prvým, ktorý sa objaví v grafe. Globulíny sú vo všeobecnosti väčšie a pohybujú sa pomalšie a protilátky, ktoré sú najväčšie z globulínov a majú najmenej „statickej elektriny“, sa pohybujú veľmi pomaly a sú poslednými, ktoré sa na grafe zobrazujú.
„… každý druh bielkovín nesie iný elektrický náboj“
Akonáhle sú proteíny rozdelené do svojich skupín, je možné zmerať množstvo každého proteínu a výsledky zobraziť v grafe. Tvar grafu nám pomáha porozumieť základnej chorobe.
Kedy by sa mala robiť elektroforéza bielkovín?
„Elektroforéza bielkovín sa odporúča vždy, keď sú celkové hladiny globulínu zvýšené a nie je známa príčina.“
Elektroforéza bielkovín sa odporúča vždy, keď sú zvýšené celkové hladiny globulínu a nie je známa príčina. Čím je vyššia hladina celkových globulínov, tým vhodnejšie je vykonať elektroforézu bielkovín. Globulíny zvyčajne rastú, ak dôjde k zápalu, poraneniu tkaniva alebo infekčnému ochoreniu. Čo je však dôležitejšie, hladiny globulínu môžu byť veľmi vysoké pri niektorých typoch rakoviny lymfoidných buniek. Keď predbežné krvné testy naznačujú, že sú zvýšené celkové hladiny globulínu, je vhodné urobiť elektroforézu bielkovín a pokúsiť sa zistiť, či je základné ochorenie zápalové alebo neoplastické.
Ako sa graf (elektroforetogram) interpretuje?
Najdôležitejšie pri interpretácii grafu elektroforézy je, či je globulín zvýšený z dôvodu nárastu mnohých rôznych globulínov alebo z dôvodu nárastu iba jedného typu globulínu. Keď je zvýšených mnoho rôznych globulínov, hovoríme o polyklonálnom zvýšení (poly = mnoho; klonálny = typ); keď je za nárast zodpovedný iba jeden typ globulínu, hovoríme o monoklonálnom zvýšení (mono = jeden; klonálny = typ). Zápal je typicky polyklonálny, zatiaľ čo lymfoidná neoplázia je pravdepodobnejšie monoklonálna. Bohužiaľ, medzi týmito dvoma všeobecnými klasifikáciami existuje určité prekrývanie.
Poskytujú výsledky vždy konečnú diagnózu?
Nie, ale niektoré závažné choroby, zápalové aj neoplastické, vytvárajú na grafe elektroforézy charakteristický vzorec, ktorý môže rýchlo viesť k definitívnej diagnóze. Pri mnohých zápalových stavoch môže elektroforéza bielkovín poskytnúť cenné informácie o závažnosti zápalu, o tom, kde môže byť lokalizovaný, a čo ho môže spôsobovať.
Príklady elektroforetogramu
Panel A: Normálny elektroforetogram na agarózovom géli u psa. Najvyšším vrcholom vľavo je albumín, za ktorým nasleduje α1 (2 vrcholy), α2 (2 vrcholy), β1 (2 vrcholy, β1a a β1b), β2 a γ (posledný plochý vrchol).
Panel B: Sérum od mačky s infekciou vírusom mačacej infekčnej peritonitídy (FIPV). Viditeľný nárastα2 globulínov (šípka), čo naznačuje odpoveď reaktantu akútnej fázy, a polyklonálnej gamapatie (šípka v oblasti γ). Tieto výsledky sú typické, ale nie špecifické, pre infekciu FIPV (je ich možné pozorovať aj pri iných zápalových stavoch).
Panel C: Sérum od psa s mnohopočetným myelómom. V oblasti γ je vysoký úzky vrchol, ktorý naznačuje monoklonálnu gamapatiu (šípka). Koncentrácie albumínu sú tiež znížené (v porovnaní s normálnym psom v paneli A).
Spoluautori: Kristiina Ruotsalo, DVM, DVSc, ACVP & Margo S. Tant, BSc, DVM, DVSc
Sam Taylor, BVetMed (Hons), CertSAM, MANZCVS, DipECVIM-CA, FRCVS a Emi Barker BSc (Hons), BVSc (Hons), PhD, DipECVIM-CA, MRCVS sumarizujú myšlienky o prejavoch a diagnostike tejto choroby a predstavujú novú éru liečby.
Obrázok 1. „Klasická“ Mačka s „klasickou“ FIP s objemným brušným výpotkom. Obrázok: Feline Center, Langford Vets, University of Bristol
FIP je spôsobený virulentnými mutáciami mačacieho koronavírusu (FCoV), ktoré ho transformujú z miernej a enterickej infekcie na závažné systémové ochorenie.
Rovnako ako ostatné koronavírusy, FCoV je veľký obalený RNA vírus – to je dôležité, keď vezmeme do úvahy vyhýbanie sa imunitnému systému, prežitie v prostredí, detekciu, liečbu a prevenciu. FIP má vysokú úmrtnosť a až donedávna boli liečebné postupy relatívne neúčinné.
Tento článok sumarizuje súčasné názory o prejavoch a diagnostike tejto choroby. Predstavuje tiež novú éru liečby FIP v súvislosti s nedávnou dostupnosťou legálnych liekov vo Veľkej Británii.
Čo spôsobuje FIP?
FCoV je alfakoronavírus, ktorý infikuje domáce mačky a iné mačky. Je z rovnakého rodu ako psí enterický koronavírus a vírus gastroenteritídy ošípaných. FCoV nemôže infikovať ľudí a je iba vzdialene príbuzný so SARS-CoV-2, betacoronavírusom a pôvodcom ochorenia COVID-19.
FCoV, ako biotyp mačacieho enterického koronavírusu (FECV), sa bežne deteguje vo výkaloch – najmä u mačiek žijúcich v domácnostiach s viacerými mačkami. Infekcia sa typicky šíri fekálno-orálnou cestou, keď sú mačiatka alebo mladé mačky v kontakte s mačkami vylučujúcimi. Šance na prežitie tohto obaleného vírusu v prostredí sú vo všeobecnosti zlé, pokiaľ nie je vírus uzavretý vo výkaloch, a je citlivý na väčšinu dezinfekčných prostriedkov.
U niektorých mačiek a v určitom okamihu po počiatočnej infekcii -medzi replikáciou vírusu v enterocytoch a účinnou replikáciou v makrofágoch a monocytoch – menej virulentný FECV mutuje do virulentnej formy spojenej s FIP – to znamená biotyp vírusu FIP (FIPV). V géne hrotového proteínu boli nájdené určité mutácie súvisiace s týmto prechodom, hoci žiadna z nich ešte nie je patognomonická pre FIP.
Vysoká frekvencia genomických mutácií – znak RNA vírusov – môže tiež uľahčiť vyhýbanie sa imunitnej odpovedi hostiteľa a poháňať tkanivový tropizmus, čo vedie k rôznym prejavom choroby. Prirodzený priamy prenos FIPV medzi mačkami sa považuje za zriedkavý, pričom sa všeobecne verí, že FIPV – a následne FIP – vzniká v dôsledku novej mutácie u FCoV individuálne infikovanej mačky.
Obrázok 2. Mierna žltačka a bledosť u mačky s FIP.
Jednou z mnohých komplexností FCoV a FIP je, že infekcia sa prejavuje mnohými rôznymi spôsobmi v závislosti od vírusových faktorov, ako sú kmeň a dávka, ale aj od imunitnej reakcie mačky a genetických faktorov.
Zdá sa, že silná bunkovo sprostredkovaná imunitná (CMI) reakcia na FCoV poskytuje ochranu pred FIP. Naproti tomu mačky s prevažne protilátkovo sprostredkovanou odpoveďou so slabou reakciou CMI typicky podľahnú efuzívnej „vlhkej“ forme choroby v dôsledku imunitne sprostredkovanej vaskulitídy, zatiaľ čo u mačiek so strednou CMI sa vyvinú tkanivové granulómy typické pre neefuzívnu „suchú“ formu FIP.
Je dôležité mať na pamäti, že efuzívna a neefuzívna forma FIP sa môžu výrazne prekrývať, čo vedie k širokému spektru symptómov; krátke epizódy efuzívnej formy FIP môžu nastať skôr, ako prevládne neefuzívna forma a naopak, v terminálnych štádiách neefuzívnej formy FIP sa môžu vytvárať výpotky. Mnoho mačiek s výpotkom má navyše tkanivové granulómy.
Klinické príznaky
Klasická prezentácia mladej mačky s ascitom bohatým na proteíny (obrázok 1) môže ponúknuť jednoduchšiu diagnostiku; ostatné mačky však môžu byť skôr diagnostickou výzvou. Medzi bežné nešpecifické príznaky patria letargia, anorexia a chudnutie.
Postihnuté mačky môžu byť febrilné so strednou horúčkou, typicky nižšou ako 40°C, ktorá často kolíše a zle reaguje na NSAID (nesteroidné antiflogistiká alebo nesteroidné protizápalové látky) alebo antimikrobiálne látky, a ikterus, ak je prítomný, je zvyčajne mierny (obrázok 2).
Obrázok 3. Hyféma, uveitída a hypopyón u mačky s okulárnou FIP.
Viskózne výpotky s vysokými hladinami bielkovín sa tvoria u približne 80% mačiek s FIP – väčšina (približne 85%) zahŕňa brušnú dutinu, kým menej prípadov vykazuje výpotok v hrudnej dutine (približne 20%).
Občas sa pozorujú perikardiálne výpotky, aj keď len zriedka spôsobujúce tamponádu, a veľmi zriedkavo sa vyskytujú skrotálne výpotky u nekastrovaných mačiek.
Pyogranulomatózne lézie sa môžu vyskytnúť v akomkoľvek tkanive, a zatiaľ čo bežne zahŕňajú brušné orgány (napríklad mezenterické lymfatické uzliny a obličky), ochorenie môže byť obmedzené na iné orgány, ako sú oči, mozog alebo miecha.
Očné príznaky zahŕňajú uveitídu, keratické zrazeniny, hypopyón, hyfému (obrázok 3) a retinitídu. Neurologické príznaky zahŕňajú ataxiu, záchvaty, nystagmus, hyperestéziu a zmeny správania/mentácie.
Diagnostika
Napriek tomu, že jedna abnormalita sama osebe neurčuje diagnózu FIP, ani ich absencia diagnózu nevylučuje, veterinár môže podozrenie na FIP postaviť na nasledujúcich zisteniach, pričom má na pamäti signalizáciu, klinický obraz, klinickú patológiu a výsledky zobrazovacích metód, ak nie je prítomná alternatívna diagnóza, pravdepodobnejšie vysvetlenie:
Obrázok 4. MRI sken mačky s FIP ukazujúci obštrukčný hydrocefalus a zvýšenie kontrastu mozgových blán.
Analýza krvi – lymfopénia, neregeneratívna anémia, mikrocytóza, neutrofília, hyperglobulinémia, nízky pomer albumín/globulín (A:G; klasicky menej ako 0,4), hyperbilirubinémia, vysoký α-1 kyslý glykoproteín (často výrazne zvýšený, viac ako 1,5 mg/ml).
Diagnostické zobrazovanie – výpotky, lézie v brušných orgánoch, abnormality CNS konzistentné so zosilnením meningeálnej oblasti a/alebo obštrukčný hydrocefalus (obrázok 4).
Analýza efúzie – neseptický pyogranulomatózny zápal s relatívne nízkym počtom buniek (celkový počet jadrových buniek vyšší ako 5 × 109/l; hlavne neutrofily a makrofágy) s vysokou koncentráciou bielkovín (často vyššou ako 35g/l) a nízkym A:G (obrázok 5).
Molekulárna diagnostika – pozitívne výsledky FCoV RNA RT-PCR v tekutinách (napríklad výpotky, komorová voda, CSF; Poznámka: falošne pozitívne a negatívne výsledky sú možné u plnej krvi) alebo aspirátoch tenkou ihlou (FNA) postihnutého orgánu (napríklad obličky, pečeň, mezenterické lymfatické uzliny); čím vyššia je vírusová záťaž, tým viac to svedčí o FIP. Poznámka: RT-PCR nemôže potvrdiť diagnózu FIP.
Vysoké hladiny protilátok FCoV naznačujú iba predchádzajúcu infekciu FCoV a neznamenajú diagnózu FIP
Definitívna diagnóza FIP je potvrdená pozitívnym imunohistochemickým farbením na antigén koronavírusu v makrofágoch spojených s patologickými zmenami FIP vo vzorkách tkaniva fixovaných formalínom. Odber vzoriek na histopatológiu a imunohistochemické farbenie však vyžaduje invazívne postupy, ktoré môžu byť u chorej mačky kontraindikované.
Obrázok 5. Analýza výpotku je užitočná pri diagnostike FIP; kde je to možné, odoberte vzorku tekutiny.
Alternatívne prítomnosť antigén-pozitívnych buniek koronavírusu v cytologických vzorkách (výpotok, komorová voda, cytospínové CSF preparáty alebo FNA z akýchkoľvek abnormálnych orgánov – napríklad mezenterickej lymfatickej uzliny) vykazujúcich pyogranulomatózne zmeny sú veľmi nápomocné pri diagnostike a umožnujú menej invazívne získanie vzoriek.
Niektorí vedci použili bunkové pelety pripravené z centrifugovaných vzoriek efúzie na zlepšenie citlivosti imunohistochemického farbenia (Tasker a kol, 2021).
Je však dôležité čo najspoľahlivejšie diagnostikovať FIP pred liečbou, pretože na uvedené klinické príznaky existuje mnoho ďalších diferenciálnych diagnóz – vrátane neoplázie (najmä lymfómu), iných infekčných chorôb (pyotorax, toxoplazmóza, mykobakterióza, plesňové infekcie) ) a primárne imunitne sprostredkované ochorenie (idiopatická encefalitída, uveitída, lymfocytová cholangitída). Na obrázku 6 je graf naznačujúci možné diagnostické cesty.
Minimálne invazívny odber vzoriek môže zahŕňať odber brušných alebo hrudných výpotkov a FNA abnormálnych orgánov.
Podrobnejšie diagnostické vývojové diagramy pri diagnóze FIP sú dostupné na webovej stránke Európskeho poradného výboru pre choroby mačiek (www.abcdcatsvets.org/feline-infectious-peritonitis).
Obrázok 6. Prístup k diagnostike FIP
Liečba FIP pomocou antivírusových liekov
V posledných rokoch sa publikácie zameriavali na antivírusové lieky (GS-441524, nukleozidový analóg, ktorý inhibuje vírusovú RNA polymerázu, a GC376, inhibítor vírusovej proteázy) s potenciálom vyliečiť mačky experimentálne vyvolanou (Kim et al, 2016; Murphy et al, 2018) a prirodzene získanou (Pedersen et al, 2018; 2019; Dickinson et al, 2020) FIP.
Nanešťastie, až donedávna (pozri ďalej), legálne formulácie týchto liekov neboli komerčne dostupné, aj keď niektorí majitelia získavali a podávali nezákonné formulácie svojim mačkám neznámeho pôvodu a za veľké náklady.
Remdesivir, proliečivo GS-441524, je antivírusový liek so širokým spektrom účinku proti RNA vírusom. Pôvodne bol vyvinutý na liečbu vírusu hepatitídy C a vírusu Ebola u ľudí. Jeho vývoj bol potom výrazne urýchlený kvôli celosvetovej liečbe SARS-CoV-2.
V Austrálii je remdesivir legálne dostupný veterinárnym lekárom niekoľko mesiacov ako „špeciálna“ formulácia, ktorá umožňuje veterinárom získať skúsenosti s týmto liekom pri liečbe mačiek a mačiatok s FIP, kde preukázal sľubné výsledky. Na rozdiel od GS-441524 má remdesivir nízku orálnu biologickú dostupnosť a u ľudských pacientov sa podáva vo forme intravenóznej infúzie.
Vo Veľkej Británii je remdesivir legálne dostupný prostredníctvom spoločnosti Gilead Sciences, ktorá je držiteľom patentu a vyrába liek na humánne použitie. Aktuálne dostupnou formuláciou je Veklury, prášok na rekonštitúciu s vodou pre injekčné roztoky na konečnú koncentráciu remdesiviru 5 mg/ml. Po rekonštitúcii by mal byť vychladený a spotrebovaný do 24 hodín.
Obrázok 7. Vialky s preformulovaným remdesivirom budú k dispozícii na liečbu FIP, legálne, vo Veľkej Británii od augusta 2021.
U mačiek sa neoficiálne spravidla podáva SC, aj keď niektorým mačkám môže prospieť počiatočné IV podanie. Od augusta 2021 bude remdesivir k dispozícii aj u výrobcu špeciálnych liekov ako veterinárny „špeciál“ (obrázok 7) vo Veľkej Británii. Reformulovaný remdesivir bude dodávaný v injekčných liekovkách obsahujúcich 100 mg remdesiviru, v koncentrácii 10 mg/ml, čo umožňuje menšie injekčné objemy, s dobou použiteľnosti pri vhodnom skladovaní najmenej tri mesiace.
Skúsenosti našich kolegov z Austrálie (Malik, osobná komunikácia) nám umožňujú navrhovať dávky podľa uvedeného plánu. Autori zdôrazňujú potrebu diagnostiky FIP pred použitím tohto lieku, aby sa zaistilo jeho správne použitie, pričom pripúšťajú, že diagnóza FIP môže byť predpokladaná z dôvodu klinických alebo finančných diagnostických obmedzení.
Náklady, predĺžený charakter liečebného cyklu (odporúča sa minimálne 12 týždňov), potenciálne nepohodlie pri SC injekciách a riziko relapsu je potrebné pred začatím terapie prediskutovať s majiteľmi mačiek.
Majitelia môžu byť naučení podávať každodenné injekcie svojej mačke, ale musia byť dôkladne vyškolení, aby sa vyhli neúmyselnej samoaplikácii, nesprávnej technike, ktorá môže mačke ublížiť, a aby minimalizovali riziko nežiaducej reakcie mačky na injekcie vedúcej k poraneniu uhryznutím alebo poškriabaním. Tento liečebný proces vyžaduje angažovaných majiteľov a je emocionálnym aj významným finančným záväzkom.
V závislosti od klinického stavu mačky je stále potrebná podporná terapia (napríklad IV alebo SC tekutiny, antiemetická stimulácia a chuť do jedla, analgézia, nutričná podpora prostredníctvom sondy, antimikrobiálne látky na sepsu). Mačky s uveitídou môžu vyžadovať topickú liečbu kortikosteroidmi a mačky s neurologickými príznakmi môžu potrebovať lieky proti záchvatom.
Obrázok 8. Bengálske mačiatko s okulárnou a neurologickou FIP pred (vľavo) a po (vpravo) liečbe remdesivirom.
Napriek tomu, že systémové používanie kortikosteroidov sa spravidla neodporúča súbežne s používaním antivirotík, u mačiek so silným podozrením na sekundárne imunitne sprostredkované ochorenie v dôsledku FIP (napríklad imunitne sprostredkovaná hemolytická anémia) je možné zvážiť krátkodobé podávanie kortikosteroidov.
Miera úspečnosti liečby je vysoká – 80% až 95% (Malik, osobná komunikácia; obrázok 8) – a preto máme dôvod byť optimistickí pri diskusii o liečbe s klientmi, aj keď si uvedomujeme záväzok a súvisiace náklady a potenciál relapsu.
Zvýšenie úspešnosti liečby
Liečba je dlhá a remdesivir môže byť pri aplikácii injekcie bolestivý. Liek sa po otvorení skladuje v chladničke a pred injekciou sa má zohriať na izbovú teplotu. Veľkosť ihly môže ovplyvniť nepohodlie; pre niektorých pacientov môže byť výhodnejšie rýchlejšie injekčné podanie „zelenej“ ihly (21G) s väčším priemerom, zatiaľ čo iným prospeje „oranžová“ (25G) ihla s menším priemerom. Na každú injekciu sa má použiť nová ihla.
Niektoré mačky budú musieť denne chodiť na aplikáciu injekcie na kliniku každý deň. Gabapentín alebo trazodón (oba v dávke 50 mg až 100 mg orálne na mačku), podávané dve hodiny pred termínom na zníženie úzkosti a bolesti, môžu niektorým mačkám prospieť. Iné mačky môžu potrebovať dávku buprenorfínu (0,02 mg/kg až 0,03 mg/kg transmukozálne alebo IM na klinike pred liečbou).
Na zníženie nepohodlia je možné miesto vpichu ostrihať a 45 až 60 minút pred injekciou aplikovať lokálny anestetický krém EMLA. Zdá sa, že tolerancia injekcie sa medzi jednotlivými mačkami líši.
Remdesivir pri liečbe FIP
Dávkovanie
FIP s výpotkami (tj ascites a/alebo pleurálny výpotok), ale bez akéhokoľvek očného alebo neurologického postihnutia: 7 mg/kg až 8mg/kg jedenkrát denne.
FIP s okulárnymi príznakmi (to znamená uveitídu alebo iné postihnutie oka, ale bez neurologického postihnutia): 10 mg/kg jedenkrát denne.
FIP s neurologickými príznakmi: 12 mg/kg až 15mg/kg jedenkrát denne.
Spôsob podávania
Väčšina prípadov: SC injekcia do voľnej kože medzilopatkovej oblasti.
Veľmi ťažké prípady: 10mg/kg sa môže spočiatku podávať intravenóznou infúziou (tj. zriediť v 10 ml fyziologického roztoku a podávať pomaly počas 10 až 20 minút), aby sa dosiahol rýchly antivírusový účinok; to môže byť prevedené po troch až štyroch dňoch na SC injekciu, akonáhle mačka začne jesť a zlepšuje sa jej zdravotný stav. Poznámka: po intravenóznej aplikácii sa u niektorých mačiek na niekoľko hodín môže dostavť depresia.
Dĺžka liečby
Treba počítať s liečbou v trvaní minimálne 84 dní (tj. 12 týždňov). Táto doba je založená na klinickej štúdii s GS-441524 a neoficiálnom použití remdesiviru na minimalizáciu pravdepodobnosti relapsu FIP.
Po 84 dňoch sa má liečba ukončiť iba vtedy, ak je pacient klinicky v poriadku a abnormálne laboratórne parametre sa vrátili do normálu.
Ak je reakcia na liečbu len čiastočná alebo neuspokojivá, môže byť potrebné predĺženie liečby.
Monitorovanie
V prvých dňoch pozorne sledujte klinické príznaky: – Zlepšenie by malo byť rýchle, v priebehu niekoľkých dní, s nárastom hmotnosti a zlepšením klinických príznakov. – Zvážte verifiikáciu diagnózy, ak nie je zaznamenané žiadne zlepšenie (s ohľadom na nasledujúce symptómy): • Efúzie (obzvlášť pleurálne) sa môžu na jeden až dva dni zhoršiť na začiatku liečby a môžu vyžadovať terapeutickú torakocentézu alebo abdominocentézu. Zdá sa, že k tomu dochádza najčastejšie po IV liečbe. Zvážte monitorovanie raz alebo dvakrát denne pomocou ultrazvuku. • Neurologické príznaky sa môžu spočiatku objaviť alebo zhoršiť v prvých dňoch liečby. To môže zahŕňať rozvoj záchvatov, ktoré môžu vyžadovať lekársku starostlivosť (napríklad levetiracetam 20 mg/kg až 30 mg/kg každých osem hodín).
Váha by mala byť pravidelne kontrolovaná a dávky podľa toho upravované.
Monitorujte PCV, celkové proteíny (albumín a globulín), bilirubín a ďalšie abnormálne parametre, kým sa vrátia do normálu. Frekvencia monitorovania sa medzi veterinármi líši; spravidla sa vykonáva mesačné hodnotenie biochémie a hematológie, ale malo by sa prispôsobiť financiám klienta a reakcii a správaniu mačky.
Sérové globulíny sa môžu spočiatku zvyšovať, ale každá hyperglobulinémia zvyčajne ustúpi do 12. týždňa.
Uvádza sa, že remdesivir spôsobuje u ľudí reno/hepatotoxicitu, ale tie boli pozorované iba pri vyšších dávkach našimi austrálskymi kolegami, ktoré ustúpili, keď bola dávka znížená. *V závislosti od reakcie môžu byť potrebné vyššie dávky. Použitie nižších dávok na zníženie nákladov môže zvýšiť pravdepodobnosť zlyhania liečby. Upozorňujeme, že tieto odporúčania pre dávkovanie sa môžu meniť v závislosti od rastúceho množstva údajov a klinických skúseností veterinárov používajúcich tento liek. Odporúča sa konzultácia s odborníkom na mačky alebo internú medicínu, aby sa prediskutoval individuálny prípad a vhodné dávkovanie.
Ďalšia liečba
Vedci skúmajú priaznivé účinky imunostimulantov a/alebo iných antivírusových liekov, ako sú interferóny alebo meflochín, akonáhle je liečba remdesivirom ukončená, alebo ak sa injekcie považujú za príliš bolestivé. Väčšina doposiaľ publikovaných štúdií sa zamerala na použitie samotných antivirotík.
Poďakovania
Autori chcú poďakovať austrálskym kolegom Davidovi Hughesovi, Rebecce Bradyovej a Richardovi Malikovi za zdieľanie svojich skúseností s liečbou remdesivirom u mačiek s FIP. Ďakujeme aj Séverine Tasker a profesorke Gunn-Moore za pripomieky k článku.
Potrebujete poradiť s liečbou FIP?
Stephanie Sorrell a Danièlle Gunn-Moore z University of Edinburgh budú robiť nábor prípadov s cieľom sledovať reakciu mačiek vo Veľkej Británii na remdesivir, ďalšie informácie budú čoskoro nasledovať.
Ak je medzitým potrebná rada ohľadom diagnostiky a liečby suspektného prípadu FIP, pošlite e-mail na adresu fipadvice@gmail.com
Referencie
Dickinson PJ, Bannasch M, Thomasy SM, Murthy VD, Vernau KM, Liepnieks M, Montgomery E, Knickelbein KE, Murphy B and Pedersen NC (2020). Antiviral treatment using the adenosine nucleoside analogue GS-441524 in cats with clinically diagnosed neurological feline infectious peritonitis, Journal of Veterinary Internal Medicine34(4): 1,587-1,593.
Kim Y, Liu H, Galasiti Kankanamalage AC, Sahani Weerasekara S, Hua DH, Groutas WC, Chang K and Pedersen NC (2016). Reversal of the progression of fatal coronavirus infection in cats by a broad-spectrum coronavirus protease inhibitor, PLOS Pathogens12(3): e1005531.
Murphy BG, Perron M, Murakami E, Bauer K , Park Y, Eckstrand C, Liepnieks M and Pedersen NC (2018). The nucleoside analog GS-441524 strongly inhibits feline infectious peritonitis (FIP) virus in tissue culture and experimental cat infection studies, Veterinary Microbiology219: 226-233.
Pedersen NC, Kim Y, Liu H, Galasiti Kankanamalage AC, Eckstrand C, Groutas WC, Bannasch M, Meadows JM and Chang K-O (2018). Efficacy of a 3C-like protease inhibitor in treating various forms of acquired feline infectious peritonitis, Journal of Feline Medicine and Surgery20(4): 378-392.
Pedersen NC, Perron M, Bannasch M, Montgomery E, Murakami E, Liepnieks M and Liu H (2019). Efficacy, and safety of the nucleoside analog GS-441524 for treatment of cats with naturally occurring feline infectious peritonitis, Journal of Feline Medicine and Surgery21(4): 271-281.
Autori: Linda Brunotte, Shuyu Zheng, Angeles Mecate-Zambrano, Jing Tang, Stephan Ludwig, Ursula Rescher, and Sebastian Schloer
Abstrakt
Prebiehajúca pandémia SARS-CoV-2 si vyžaduje účinné a bezpečné stratégie antivírusovej liečby. Repurposing liekov predstavuje rýchly a lacný prístup k vývoju nových možností liečby. Zistilo sa, že priamy antivírusový agens remdesivir vykazuje antivírusovú aktivitu proti SARS-CoV-2. Zatiaľ čo remdesivir má len veľmi krátky polčas rozpadu a bioaktiváciu, ktorá závisí od enzýmov aktivujúcich proliečivo, jeho plazmatický metabolit GS-441524 sa môže aktivovať prostredníctvom rôznych kináz vrátane adenozínkinázy (ADK), ktorá je stredne exprimovaná vo všetkých tkanivách. Farmakokinetika GS-441524 svedčí o tom, že ide o vhodné antivírusové liečivo, ktoré sa môže podávať pacientom s COVID-19. V tejto práci sme analyzovali antivírusové vlastnosti kombinovanej liečby metabolitom remdesiviru GS-441524 a antidepresívom fluoxetínom v polarizovanom modeli bunkovej kultúry Calu-3 proti SARS-CoV-2. Kombinovaná liečba s GS-441524 a fluoxetínom bola dobre tolerovaná a vykazovala synergické antivírusové účinky proti trom cirkulujúcim variantom SARS-CoV-2 in vitro v bežne používaných referenčných modeloch pre liekové interakcie. Kombinovaná liečba liekom GS-441524 zameraným na vírus a liekom fluoxetínom zameraným na hostiteľa by teda mohla ponúknuť vhodnú terapeutickú možnosť liečby infekcií SARS-CoV-2.
Poznámka prekladateľa: Fluoxetine sa vyrába pod rôznymi obchodnými názvami, z ktorých asi najznámejší je Prozac.
Kontaktoval ma niekto s 5 mačkami, ktoré ochoreli potom, čo jeden z ich ľudí ochorel na COVID-19. Mačky mali horúčky, kýchali, kašľali a zvuky vydávali len s ťazkosťami. Táto osoba chcela vedieť, či by sa mačky mali liečiť s infekciou COVID-19. Opýtal som sa Dr. Pedersena a nižšie je jeho odpoveď (zdieľaná s jeho súhlasom).
[Dr. Niels Pedersen] – Mačky sa nakazia vírusom SARS-CoV-2, ktorý buď nespôsobí nespôsobí žiadne ochorenie, alebo iba miernu a prechodnú infekciu horných dýchacích ciest, podobne ako veľmi mierny prípad mačacieho herpesvírusu. V zriedkavých prípadoch môže byť ochorenie u mačiek závažné. V skutočnosti je šanca, že táto skupina mačiek trpí herpesvírusom, a nie koronavírusovým ochorením Covid-19. Veterinári môžu testovať mačky na herpesvirózu pomocou metódou PCR, ale neexistuje žiadny test, ktorý by mal veterinár k dispozícii pre Covid-19 a ľudské laboratóriá odmietajú testovať mačky na Covid-19 pomocou testov určených pre ľudí.
Pri ktorejkoľvek z týchto infekcií sa mačky bežne uzdravia za 10-14 dní bez liečby alebo s minimálnou liečbou. Ak sú príznaky ochorenia, ktoré sa u nich objavia, spôsobené vírusom SARS-CoV-2, reagovali by síce na GS, ale prečo ich liečiť? Bolo by to ako liečiť každého človeka s pozitívnym PCR testom na Covid-19 Remdesivirom počas 5 dní za cenu 2 000 dolárov. Samozrejme, mačky nie sú také veľké a nestálo by toľko, ale museli by byť bezdôvodne podrobované každodenným injekciám. Je tiež pravdepodobné, že veterinár by aj tak nemal prístup k Remdesiviru, pretože ten je v súčasnosti obmedzený na použitie v nemocnici pre určitú skupinu pacientov.
Stručne povedané, moje odporúčanie by bolo otestovať niekoľko horších prípadov na mačací herpesvírus, a je veľká pravdepodobnosť, že budú pozitívne. Ak budú mať test negatívny, existuje šanca, že majú infekciu vírusom Covid-19, ale v oboch prípadoch bude liečba rovnaká. Mačky by mali odpočívať, mali by ste lokálne ošetrovať výtoky, z očí a nosa, a antibiotiká by sa mali používať iba vtedy, ak sa sa jedná o hnisavé výtoky, čo naznačuje sekundárnu bakteriálnu infekciu. Zriedkavo sa môžu vyskytnúť problémy s dýchaním, horúčka a anorexia, ktoré naznačujú sekundárnu bakteriálnu pneumóniu a potrebu agresívnejšej symptomatickej liečby. Vyliečia sa za 10-14 dní.
V článku sa opakovane používa označenie FIP aj pre obyčajný nezmutovaný enterický koronavírus FCoV, pravdepodobne kvôli zjednodušeniu. Podstata však ostáva zachovaná. (Poznámka prekladateľa)
Vedecká komunita je znepokojená novým koronavírusom, ktorý sa objavil pred rokom a pol v Číne. Jean-Marc Sabatier* prvýkrát uvádza analógiu medzi koronavírusom infekčnej peritonitídy mačiek alebo FIP (neprenosným na ľudí) a SARS-CoV-2, ktorý spôsobuje Covid-19. Lepšie pochopenie komplexných fyziologických javov spoločných pre oba vírusy môže v budúcnosti poskytnúť definitívnu medicínsku odpoveď na pandémiu. Rozhovor.
V spolupráci s vedúcimi Štátneho virologického laboratória vo Wu-chane (Čína), profesormi Zhijian Cao a Yingliang Wu a veterinárnymi lekármi Pierrom Petruzzim (Clinique Vétérinaire de l’Albanne v Barberaz, Savojsko) a Philippom Durieuxom (CHV Les Cordeliers, Meaux), ste poukázali na pozoruhodné podobnosti medzi chorobou mačiek a Covid-19. Môžete nám to bližšie vysvetliť?
Mačacia infekčná peritonitída (FIP) je vírusové ochorenie mačiek spôsobené alfa-koronavírusom, zatiaľ čo SARS-CoV-2 zodpovedný za Covid-19 je beta-koronavírus. Ide o súvisiace vírusy. Vírus FIP je nákazlivý pre mačky, ale neprenáša sa na iné druhy, vrátane ľudí. FIP je dobre známy a dokumentovaný od 80. rokov minulého storočia. O vírusoch FIP je známe, že sú enterickými koronavírusmi, ktoré sa stali patogénnymi v dôsledku mutácie (mutácií) a postihujú buď mladé mačky (vo veku od 3 mesiacov do 3 rokov), alebo staršie mačky (vo veku 10 až 15 rokov). Patológie súvisiace s FIP sú podobné ochoreniam Covid-19.
Čo to znamená?
Klinické príznaky FIP sú veľmi rozmanité, ako u Covid-19, a choroba sa delí na „suchú“ a „vlhkú“ formu. Suchá forma može postihúť oči, môže spôsobiť granulomatózne zápaly pľúc, obličiek, pečene, centrálneho nervového systému, ganglií, čriev s možnými neurologickými poruchami… Vlhká forma sa prejavuje výpotkami v bruchu alebo hrudníku, zápalom pohrudnice (pleuritída), zápalom pobrušnice (peritonitída), ktoré sú tiež dobre definované v prípade Covid-19. Pre obe formy ochorenia sú spoločné ďalšie klinické prejavy: zápal orgánov, trombóza, trombocytopénia, koagulopatia atď. Suchá a vlhká forma môžu koexistovať alebo na seba nadväzovať. Infekcia makrofágov vírusom FIP je zodpovedná za smrteľnú granulomatóznu vaskulitídu mačiek.
Čo je ešte vieme o tejto chorobe mačiek?
Vírus FIP môže byť latentný a neškodný roky (až 14 alebo 15 rokov) alebo sa môže množiť a v krátkom časovom období sa stane smrteľným. Progresia do ťažkej formy trvá v priemere 2 až 5 týždňov. Mačky nemôžu prenášať vírus FIP na ľudí, ale mačky môžu byť (výnimočne) infikované SARS-CoV-2, ktorý spôsobuje Covid-19. Latencia pozorovaná u vírusu FIP vyvoláva otázku ohľadne možnej latencie Sars-CoV-2 vzhľadom na podobnosť medzi týmito dvoma vírusmi.
Ako sa vírus prenáša medzi mačkami?
Vírus sa prenáša z matky na mačiatka. Vírus je prítomný vo výkaloch a môže ľahko infikovať ostatné mačky, najmä v útulkoch a chovateľských staniciach.
Aké sú podobnosti medzi mačacími vírusmi a SARS-CoV-2?
Vírusy FIP a SARS-CoV-2 sú jednovláknové, pozitívne RNA obalené koronavírusy. To znamená, že aj keď je jeden z rodu alfa a druhý z rodu beta, oba sú úzko príbuzné a majú zoonotický pôvod. V skutočnosti oba vírusy útočia na hostiteľský renín-angiotenzínový systém (RAS) a nadmerná aktivácia tohto systému spôsobuje porovnateľné poruchy a patológie, aj keď tieto dva vírusy pôsobia na odlišné bunkové receptory. Vírus FIP má ako bunkový receptor molekulu nazývanú aminopeptidáza N (APN). Jedná sa o povrchový receptor nachádzajúci sa v črevách, obličkách, pľúcach, epiteliálnych a endotelových bunkách atď. APN prevádza angiotenzín-3 na angiotenzín-4. Angiotenzín 3 sa zameriava na receptor AT1R, ktorý je zodpovedný za Covid-19.
A čo ďalší vírus, SARS-CoV-2?
SARS-CoV-2 sa viaže na receptor ACE2 a vedie k zvýšeniu angiotenzínu 2, čo opäť vedie k nadmernej aktivácii receptora AT1R, ktorý je veľmi škodlivý, pretože je zodpovedný za Covid-19. Inými slovami, tieto dva vírusy sa zameriavajú na receptor AT1R (mačací alebo ľudský) rôznymi cestami. Je dôležité pochopiť, že APN a ACE2 sú zložkami RAS, ktorý je hlavným fyziologickým systémom dôležitým pre fungovanie organizmu, či už ide o obličkové, kardiovaskulárne alebo pľúcne funkcie. Podieľa sa tiež na črevnej mikrobiote a vrodenej imunite, a to u mačiek i ľudí.
Čo z toho vyvodzujete?
Ochorenia mačiek spôsobené vírusom FIP sú porovnateľné s ochoreniami spôsobenými SARS-CoV-2. Neexistuje žiadna špecifická liečba pre mačku, okrem symptomatických liekov. Sú potrebné inhibítory RAS.Vieme už samozrejme, že liečba existuje (Poznámka prekladateľa).
Neexistuje žiadna vakcína pre FIP?
Uskutočnili sa vakcinačné pokusy s použitím inaktivovaného vírusu FIP. Mladé mačky boli očkované avirulentným kmeňom vírusu. Toto očkovanie ich však nechránilo pred oro-nazálnou cestou nákazy virulentným vírusom. Naopak, očkované zvieratá boli infikované ľahšie ako neočkované mačky. Tento nedostatok ochrany naznačuje existenciu fenoménu nazývaného ADE (zosilnenie závislé od protilátok). ADE vedie k sledu udalostí, ktoré možno nájsť pri niekoľkých vírusových ochoreniach (HIV, Dengue, Ebola …). Vírusy infikujú bunky mechanizmom, ktorý sa spolieha na interakciu medzi takzvanými „uľahčujúcimi“ protilátkami (na rozdiel od ochranných „neutralizujúcich“ protilátok) a vírusom.
Toto je neočakávané. Vakcína teda môže podporiť ochorenie?
„Uľahčujúce“ protilátky skutočne umožňujú vírusu lepšie preniknúť do cieľových buniek. Tento mechanizmus uľahčenia infikovania buniek vírusom by bol problematický, ak by bol prítomný aj pri vakcinácii SARS-CoV-2. Liečba by potom bola horšia ako choroba. Problém, ktorý predstavuje ADE počas očkovania, je však možné obísť.
*Jean-Marc Sabatier, riaditeľ výskumu v CNRS a doktor bunkovej biológie a mikrobiológie, spolupracujúci s Ústavom neurofyziopatológie (INP), University of Aix-Marseille. Šéfredaktor medzinárodných vedeckých časopisov „Koronavírusy“ a „Infekčné poruchy – Ciele liekov“ (DR)
Mačací koronavírus (FCoV) spôsobuje subklinickú infekciu, z ktorej sa môže vyvinúť smrteľná infekčná peritonitída mačiek FIP. Spôsobuje ju vírus infekčnej peritonitídy mačiek (FIPV), ktorý vznikne vtedy, keď v spike (hrotovom) vírusovom proteíne vírusu FCoV dôjde k vzniku mutácie. Napriek viac ako troch desaťročiam výskumu vírusu stále neexistuje žiadna schválená liečba FIP. Je to čiastočne spôsobené skutočnosťou, že FIPV typu I síce spôsobuje väčšinu klinických infekcií, ale v kultúrach sa mu veľmi nedarí a je k dispozícii málo reagencií na jeho štúdium, zatiaľ čo typ II dobre rastie, má k dispozícii viac reagencií, ale spravidla nespôsobuje klinické ochorenie. Vývoj nových imunoterapií vyžaduje významné predklinické štúdium a validáciu, a kvôli obmedzeniam pri štúdiu FIPV typu I neboli vyvinuté žiadne imunoterapie pre klinickú FIP. Chceme sa pokúsiť o novú imunoterapiu s pomocou in vitro výskumu FIPV typu II, ktorý by mohol viesť k terapii mačiek FIP spôsobených FIPV typu I. Imunoterapia, ktorá si v poslednom získala pozornosť pri liečbe ľudských rakovín, sú imunitné bunky upravené pomocou chimérneho antigénneho receptora (CAR). Tento prístup ešte nebol vyvinutý pre akútne vírusové infekcie, ako je FIPV, ani sa doteraz u mačiek nepoužíval. CAR tvoria dve hlavné zložky: jednoreťazcový fragment protilátky (ScFv) a signálna doména z imunitného kostimulačného receptora. Navrhujeme použiť ScFv špecifický pre FIPV spike proteín exprimovaný v mačacích imunitných bunkách, ktoré by bolo možné podať mačke za účelom vyhľadania a zničenia buniek infikovaných FIPV. Súčasné humánne terapie CAR vyžadujú použitie autológnych T buniek, pretože alogénne T bunky zabíjajú hostiteľské bunky a vedú k reakcii štepu proti hostiteľovi (graft-versus-host disease). NK bunky (natural killers) sú predmetom stále väščieho záujmu, pretože NK bunky neindukujú reakciu štepu proti hostiteľovi, a môžu sa teda použiť v „bežných“ terapiách. O mačacích NK bunkách sa však vie len málo. Predpokladáme, že geneticky modifikované mačacie NK bunky exprimujúce CAR zamerané na spike proteín vírusu mačacej infekčnej peritonitídy typu II rozpoznajú a usmrtia cieľové bunky infikované FIPV in vitro.
Aby sme dosiahli naše ciele:
určíme cytotoxickú aktivitu podskupiny NK buniek v porovnaní s NKT a T bunkami na validáciu mačacích NK buniek ako potenciálnych nosičov CAR,
na klonovanie a sekvenovanie použijeme v súčasnej dobe dostupné hybridomové spike protilátky anti-FIPV typu II pre zostavenie CAR zameraného proti spike proteínu typu II a
in vitro validujeme test NK buniek a dáta demonštrujúce efekt CAR-NK buniek usmrcujúcich bunky infikované FIPV typu II.
Dokončenie tejto štúdie poskytne údaje dôležité pre vývoj CAR-NK terapie pre FIPV typu I, teda úplne novej liečby tejto devastujúcej choroby.
Remdesivir potláča obranu hostiteľskej bunky. Tento poznatok môže byť dôležitý pre vývoj liekov na boj proti rôznym vírusom. Foto: Bernard Chantal/shutterstock
Keď je bunka infikovaná, SARS-CoV-2 nielenže spôsobuje, že hostiteľská bunka produkuje nové vírusové častice. Vírus tiež potláča obranné mechanizmy hostiteľských buniek. Vírusový proteín nsP3 v tom hrá ústrednú úlohu. Vedci z Goethe University v spolupráci so švajčiarskym inštitútom Paula Scherrera pomocou štrukturálnych analýz zistili, že produkt rozkladu virostatického agensa remdesiviru sa viaže na nsP3. To poukazuje na ďalší, predtým neznámy účinný mechanizmus remdesiviru, ktorý môže byť dôležitý pre vývoj nových liekov na boj proti SARS-CoV-2 a iným RNA vírusom.
Virostatický prostriedok remdesivir bol vyvinutý s cieľom narušiť dôležitý krok v propagácii RNA vírusov, medzi ktoré patrí aj SARS-CoV-2: reprodukciu vlastného genetického materiálu vírusu. Ten je predstavovaný matricou RNA, pomocou ktorej hostiteľská bunka priamo produkuje vírusové proteíny. Na urýchlenie produkcie vlastných proteínov však RNA vírusy kopírujú aj samotné matrice RNA. Na tento účel používajú svoj vlastný špecifický proteín (RNA polymerázu), ktorý je remdesvirom blokovaný . Presnejšie povedané, nerobí to remdesivir samotný, ale skôr látka, ktorá sa syntetizuje z remdesiviru v piatich krokoch, keď remdesivir preniká do bunky.
V druhom z týchto piatich krokov je z remdesiviru vytvorený produkt, látka s trochu nepraktickým názvom GS-441524 (vo vedeckej terminológii: metabolit remdesiviru). GS-441524 je tiež virostatickým agensom. Ako zistili vedci v skupine vedenej profesorom Stefanom Knappom z Inštitútu pre farmaceutickú chémiu na Goetheho univerzite vo Frankfurte, GS-441524 sa zameriava na proteín SARS-CoV-2 nazývaný nsP3. nsP3 je multifunkčný proteín, ktorého úlohy zahŕňajú potlačenie obrannej reakcie hostiteľskej bunky. Hostiteľská bunka nie je tvárou v tvár napadnutiu vírusom bezmocná, pretože okrem iného aktivuje zápalové mechanizmy, ktorými povoláva k pomoci endogénny imunitný systém bunky. Proteín nsP3 ale vírusom toto volanie bunky o pomoc pomáha potlačiť.
Profesor Stefan Knapp vysvetľuje: „GS-441525 inhibuje aktivity domény nsP3, ktorá je dôležitá pre reprodukciu vírusov, a ktorá komunikuje s ľudskými bunkovými obrannými systémami. Naša štrukturálna analýza ukazuje, ako táto inhibícia funguje, čo nám umožňuje položiť dôležitý základ pre vývoj nových a účinnejších antivírusových liekov – účinných nielen proti SARS-CoV-2. Cieľová štruktúra GS-441524 je veľmi podobná aj u iných koronavírusov, napríklad SARS-CoV a MERS-CoV, ako aj v sérii alfavírusov, ako je napríklad vírus chikungunya. Z tohto dôvodu by vývoj takýchto liekov mohol pomôcť pripraviť sa na budúce vírusové pandémie. “
Poznámka prekladateľa: Proteín nsP3 obsahuje aj mačací koronavírus FCoV/FIPV.
Publication: Xiaomin Ni, Martin Schröder, Vincent Olieric, May E. Sharpe, Victor Hernandez-Olmos, Ewgenij Proschak, Daniel Merk, Stefan Knapp, Apirat Chaikuad: Structural Insights into Plasticity and Discovery of Remdesivir Metabolite GS-441524 Binding in SARS-CoV‑2 Macrodomain. ACS Med. Chem. Lett. 2021, 12, 603−609 https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acsmedchemlett.0c00684
Niekedy dávno sa učiteľka latinčiny na Mount Holyoke College, ktorá milovala mačky, rozhodla zmeniť povolanie. Vybrala si prestížnu americkú veterinársku školu tej doby, Cornell, a našla si miesto v najlepšej americkej veterinárnej nemocnici, Angell. Stala sa prvou špecialistkou na mačaciu medicínu. V roku 1962 informovala o svojich pozorovaniach podivnej a vždy smrteľnej choroby mačiek, ktorú nazvala „chronická fibrinózna peritonitída“. O dva roky neskôr veterinárny lekár v PennVet informoval o mačke s podobným ochorením. Ľudia žijú s domácimi mačkami tisíce rokov a píšu o nich stáročia. Je nepravdepodobné, že by taká vážna choroba ako FIP zostala tak dlho bez povšimnutia a bez záznamu. Verím, že koncom 50-tych rokov minulého storočia došlo k dôležitej mutácii koronavírusu. Niektorí odborníci si myslia, že došlo ku kombinácii črevnej formy psieho a mačacieho koronavírusu. (čítajte tu)
Dnes veterinári nazývajú rozšírený a zriedka nebezpečný črevný (enterický) koronavírus mačiek FCoV (= mačací enterický koronavírus alias FECV) a jeho nebezpečnú mutovanú formu, FIPV (vírus infekčnej peritonitídy mačiek). Keď dôjde k mutácii koronavírusu, často to sú vírusové hrotové (spike) proteíny, ktoré zmenia výber cieľa (bunky), na ktorý zaútočia. (čítajte tu) S hypotézou, že niečo také sa stalo u mačiek, prišla v roku 1996 skupina doktora Nielsa Pedersena z Davisu. (čítajte tu) V roku 2009 to potvrdil. (čítajte tu)
Keď vírus dosiahne mutáciu, ktorá je v jeho záujme, prevláda táto nová mutovaná forma. To nie je prípad koronavírusu FIP. Stále prevláda mierna forma FCoV mačacieho koronavírusu. Nikdy nie je v záujme vírusu zabiť hostiteľa, ktorého obýva. Väčšina veterinárov a vedcov v súčasnosti verí, že mutovaná forma FIPV mačacieho koronavírusu musí pochádzať z miernej črevnej formy FCoV u každej novej mačky, ktorá ochorie na FIP (alebo sa jej ju podarí prekonať). U väčšiny mačiek sa táto mutácia pravdepodobne nikdy nevyskytne. V súčasnej dobe veríme, že sa tak stane asi u 8-10% mačiek. Z týchto mačiek niektoré prekonajú vírus samy a prežijú, niektoré nie. Až do nedávnych objavov na veterinárnej škole v Davise v Kalifornii všetky mačky, ktoré začali vykazovať príznaky choroby, uhynuli. Genetické faktory jedinečné pre vašu mačku sú nepochybne ďalším faktorom, na ktorom záleží, či u mačky vypukne alebo nevypukne FIP. Je tiež známe, že experimentálny prenos mutovaného koronavírusu FIPV z chorej mačky na zdravú mačku spôsobí vypuknutie FIP u väčšiny mačiek. (čítajte tu)
Ako častá je obyčajná mierna črevná forma mačacieho koronavírusu?
Obyčajný, mierny, mačací koronavírus (FCoV) je u mačiek na celom svete celkom bežný. Niektoré štúdie uvádzajú, že mu bola vystavená takmer polovica domácich mačiek na svete. V niektorých mestských oblastiach sa s vírusom stretlo až deväť z desiatich mačiek. Je však pomerne dôležité, od ktorých mačiek sa v skutočne odoberú vzorky. (prečítajte si tu, tu, tu a tu) V týchto štúdiách je počet FCoV-pozitívnych mačiek žijúcich v skupinach oveľa vyšší ako u tých, ktoré žijú v individuálnych domácnostiach. Mačky v odľahlých izolovaných oblastiach zrejme žijú svoj život bez koronavírusu. (čítajte tu a tu)
Detekcia predchádzajúcej expozície vírusu FCoV pomocou bežných testov na báze protilátok nemusí nevyhnutne znamenať, že vírus je vo vašej mačke stále prítomný. A nedostatok protilátok sa môže objaviť aj na začiatku skutočnej infekcie FCoV. Nech sú skutočné čísla akékoľvek, vírus je oveľa bežnejší, než by si veterinári priali. Keď mačky nie sú koncentrované viac, ako by príroda chcela, mierna forma mačacieho koronavírusu a mutovaná forma FIP nie sú významnými problémami. Iba 4% divokých európskych predkov vašej mačky vykazuje známky toho, že sa niekedy stretli s koronavírusom – a aj to sa pravdepodobne stalo náhodným stretnutím s domácou mačkou. (čítajte tu)
Spôsobuje obyčajná mierna črevná forma mačacieho koronavírusu (FCoV) ochorenie?
Táto mierna forma koronavírusu je najčastejšia u mačiek mladších ako dva roky. Mnoho mačiek (pravdepodobne väčšina) nevykazuje žiadne príznaky súvisiace so zdravotným stavom. U tých, ktoré príznaky vykazujú, sa spravidla jedná len o niekoľko dní trvajúce mierne hnačky. Väčšina mačiek nakoniec eliminuje aktívny vírus zo svojho tela – aj keď nie je isté, či vírus u niektorých mačiek nepretrváva v neaktívnej forme, neschopnej replikácie, tzv. provírus. My všetci nosíme v tele provírusy.
Je vek mojej mačky dôležitý pre mutáciu bežného koronavírusu na FIPV?
Áno.
Väčšina mačiek, ktoré ochorejú na FIP, sú mladé – zvyčajne vo veku od troch do šestnástich mesiacov. Viac ako polovica má menej ako jeden rok. V jednej kalifornskej štúdii si laboratórne chované mačky vyvinuli zvýšenú odolnosť voči infekciám FIP vo veku 6 až 12 mesiacov. To znamená, že FIP sa príležitostne vyvinie aj u starších mačiek. Veterinári nevedia, či je u imunitných systémov starších mačiek väčšia pravdepodobnosť, že zlikvidujú mutanty koronavírusu v zárodku (zničia ich skôr, ako sa môžu množiť) alebo či je u vírusu menšia pravdepodobnosť mutácie u starších mačiek alebo či sú zahrnuté ďalšie neznáme faktory. (čítajte tu)
Ako sa z bežnej infekcie koronavírusom stane prípad FIP?
Príroda stvorila vírusy tak, aby náhodne menili svoju štruktúru v nekonečnom boji o porážku imunitného systému a pokračovali v invázii k novému vnímavému hostiteľovi. Je to síce náhodný, ale veľmi efektívny prístup. Väčšina týchto náhodných genetických zmien v zložení vírusu (mutácie) je neúspešná. Vírusy, ktoré nesú tieto neúspešné mutácie, sú zničené a už o nich nikto nepočul. Ale občas úplnou náhodou dôjde k mutácii, ktorá vírusu prinesie určité výhody. Keď k tomu dôjde, tento mutovaný vírus sa stane prevládajúcou formou. Koronavírus je známy častými mutáciami, ktoré im umožňujú preskakovať medzi druhmi alebo útočiť na nové časti tela, na ktoré predtým nemohli. Útok na nový druh alebo novú oblasť tela často zahŕňa zmeny v povrchových hrotových vírusových proteínoch, ktoré som už spomenul. V prípade mutácie FCoV na FIPV to umožňuje vírusu napadnúť nový typ buniek, makrofágy a monocyty vašej mačky. Táto transformácia alebo zmena v preferenciách vírusu (tropizmus) spôsobuje, že imunitný systém mačky sa rozbieha, čo spôsobuje vážny zápal, pretože bunky imunitného systému napádajú bunky mačky, ktoré v sebe vírus nesú (uvoľnenie prozápalových cytokínov). (čítajte tu, tu a tu)
Neverím, že mierna mutácia enterického koronavírusu mačiek (FCoV) na vysoko patogénny (nebezpečný) vírus infekčnej peritonitídy mačiek (FIPV) ponúka koronavírusu akékoľvek výhody. Zabitie hostiteľa nie je pre vírus nikdy výhodou. Verím preto, že FIP sa vyskytuje iba u malého počtu mačiek, ktoré su nositeľmi FCoV. Mutácie FIPV sa pravdepodobne vyskytujú u oveľa viac mačiek, ako u tých, u ktorých sa vyvinula choroba FIP. Ale v týchto mačkách ich telo rozpozná a zničí tieto mutanty krátko potom, čo sa objavia. Niektoré zdroje uvádzajú, že FIP sa vyvíja u 5-10% mačiek infikovaných FCoV. Skutočné počty sú však pravdepodobne oveľa nižšie ako v bežnej populácii mačiek. Dôvodom je, že veľká časť zdravých mačiek nikdy nenavštívi veterinárneho lekára, alebo ak tak urobia, je to len na pravidelné očkovanie. Ak budete zisťovať, akí pacienti prichádzajú na kliniku, väčšina z nich je chorých.
Existuje viac foriem FIP?
Áno.
Veterinári spravidla rozlišujú dve formy FIP, vlhkú a suchú. U „vlhkej“ formy sa na povrchu brušných a/alebo hrudných orgánov mačky produkujú zápalové tekutiny. V „suchej“ forme dochádza k zápalu v telesných orgánoch bez produkcie nadbytočných tekutín. U tej istej mačky sa príležitostne vyskytujú príznaky oboch foriem.
Vlhká alebo efúzna forma FIP
Toto bola prvá forma FIP, ktorú veterinári ako Jean Holzworth rozpoznali. Pri efuzívnej alebo vlhkej forme FIP sa tekutina hromadí v hrudníku alebo bruchu vašej mačky alebo v oboch. Táto uniknutá tekutina je predovšetkým výsledkom toho, že imunitný systém mačky útočí na to, čo vníma ako hrozbu od cudzieho útočníka (prítomnosť bielkovín, ktoré nepatria do tela mačky = antigény). Väčšina veterinárnych lekárov sa domnieva, že táto nahromadená tekutina (exsudát) nie je spôsobená žiadnym priamym poškodením, ktoré vírus spôsobuje v bunkách tela mačky, ktoré obýva. Je to vlastná cytokínmi vyvolaná zápalová reakcia mačky, ktorá uvoľňuje zmes tekutiny (krvné sérum) a bielkovín (globulín a fibrín), ako aj bielych krviniek, ktoré by sa za normálnych okolností obmedzovali na krvný obeh vašej mačky. Táto tekutina má charakteristickú hustú („fibrinóznu“) konzistenciu so žltkastým vzhľadom, z ktorej ma vždy zabolí srdce, keď ju vidím pomaly nasávať do striekačky.
Váš veterinárny lekár pravdepodobne poklepaním (vytiahnutím) skontroluje tekutinu, aby potvrdil podozrenia, a potom vykoná testy na potvrdenie, že tekutina je skutočne exsudát. Na röntgenových snímkoch má táto kvapalina charakteristický zrnitý vzhľad (vzhľad „brúseného skla“). Keď sa nájde tekutina v bruchu vašej mačky, mysľou vášho veterinárneho lekára preletia aj iné možné príčiny. Lymfómové nádory, ochorenie srdca alebo pečene alebo dokonca prasknutý močový mechúr sú príležitostne príčinou brušnej tekutiny. Iné laboratórne testy vylúčia tieto príčiny. Keď je tekutina v hrudníku mačky (pleurálny výpotok), iné testy rozlíšia zápalovú tekutinu (exsudát) od lymfatickej chyly. Keď majú mačky v hrudníku nahromadené tekutiny, váš veterinár by mohol poznamenať, že srdcové ozvy vašej mačky sú tlmené a je ťažké ich počuť cez stetoskop (ťažko auskultovať). Keď je postihnutá pečeň mačky, jej ďasná, okrem toho, že sú bledé od anémie, môžu mať mierne žltkastý nádych (žltačka). Keď sa u mačiatka objaví efuzívna FIP, môže sa zdať, že mláďa chradne alebo prestalo uspokojivo rásť.
Suchá, alebo neefuzívna, pyogranulomatózna forma FIP
Granulómy sa skladajú z buniek imunitného systému, ktoré sa zhromažďujú okolo objektov a chorobných organizmov, ktoré sa telo pokúša oddeliť alebo odstrániť. Keď sú bunky infikované koronavírusom FIP primárne umiestnené v orgánoch, toto je spôsob, akým na ne mačka útočí. Tieto udalosti sa môžu odohrávať v pečeni, obličkách, lymfatických uzlinách, očiach alebo nervovom systéme vašej mačky, alebo v akejkoľvek ich kombinácii. Nie je potrebné hovoriť, že symptómy, ktoré vidia majitelia mačiek a veterinári, sú veľmi variabilné. Veterinári túto formu nazývajú „suchou“ formou FIP, pretože na rozdiel od efuzívnej formy sa prebytočná tekutina nehromadí – alebo aspoň neprevažuje. Suchá forma sa niekedy nazýva „parenchymatózna“. Funkčné bunky rôznych orgánov sa nazývajú parenchým.
Tieto zmeny vyvolané suchou formou FIP majú tendenciu začať postupne. Sú také nešpecifické, že by mohli mať veľa vysvetlení, ktoré nesúvisia s FIP. Zápalové zmeny v oku (očiach) (uveitída) sú učebnicovým symptómom neefuzívnej formy FIP. Tento príznak pravdepodobne spustí poplach FIP skôr ako väčšina ostatných. To platí najmä vtedy, ak je sprevádzaný inými zmenami nervového systému alebo očí. Tieto neurologické problémy môžu zahŕňať krívanie, záchvaty alebo len namáhavú a nestabilnú chôdzu v zadnej časti (ataxia). U obidvoch foriem FIP nie je neobvyklé, že mi majiteľ povedal, že mačka zažila počas posledných mesiacov veľkú stresovú udalosť. Udalosti, ako je strava, nová mačka v domácnosti, sťahovanie, súperiaca mačka v susedstve alebo iný problém, o ktorom sa myslelo, že je vyriešený. Ďalšou typickou anamnézou je, že mačka bola nedávno získaná z útulku, domova s početnými mačkami alebo súkromnej chovateľskej stanice. (čítajte tu a tu)
Ako sa bežný miernejší koronavírus (FECV) prenáša medzi mačkami?
Bežnejšia, miernejšia, nemutovaná forma FCoV mačacieho koronavírusu žije v bunkách, ktoré lemujú črevo vašej mačky. Po uvoľnení sú tieto vírusy vo veľkom množstve vylučované mačacími výkalmi. (čítajte tu) Mačky, ktoré sa navzájom upravujú alebo zdieľajú toaletu, predstavujú najbežnejšie spôsoby prenosu tohto vírusu na inú mačku. Aj keď nikto nezdokumentoval dobu prežitia koronavírusu mačiek v životnom prostredí, koronavírus vo všeobecnosti prežíva v prostredí maximálne niekoľko dní. Väčšina veterinárov teda neverí, že kontaminované predmety v prostredí vašej mačky sú zdrojom mnohých (ak vôbec nejakých) infekcií. Pravidelná výmena steliva v domácnostiach s viacerými mačkami je ale vždy dobrý nápad. Keď o privedení novej mačky do vašej domácnosti, PCR test (FCoV RT-PCR) jej výkalov môže vášmu veterinárnemu lekárovi povedať, či sa v tej dobe v stolici nachádza vírus FCoV. Vylučovanie vírusu FCoV je však často prerušované. A na začiatku infekcií môžu byť výsledky testov negatívne, aj keď je vírus už prítomný v stolici mačky – ale v takom počte, ktorý je príliš nízky na to, aby ho test PCR dokázal zistiť.
Ako sa nebezpečný FIP-zmutovaný koronavírus prenáša medzi mačkami?
Veterinári neveria, že k prirodzenému prenosu vírusu FIP z mačky na mačku dochádza často. Je známe, že mačky infikované FIV vylučujú do stolice veľmi málo alebo žiadny mutovaný vírus. (čítajte tu) Väčšina veterinárov sa v súčasnosti domnieva, že každý prípad FIP si vyžaduje novú mutáciu bežného vírusu FCoV potom, ako nakazí novú mačku. Jeden článok to spochybňuje. Nikto však nedokázal tieto výsledky duplikovať. (čítajte tu)
Keď nová mutácia vytvorí nebezpečný vírus infekčnej peritonitídy mačiek (FIPV), u istého percenta mačiek dochádza k vývoju FIP. Nestane sa tak ale u všetkých mačiek. Experimentálne môžu vedci extrahovať vírus FIP z chorej mačky a injektovať ho priamo do inej mačky. To často vedie k vypuknutiu FIP u druhej mačky. Nemyslíme si však, že sa toto deje i v skutočnom svete. Naproti tomu komplexné interakcie medzi vírusom a imunitným systémom mačky, nespočetné množstvo spôsobov, akými môže vírus mutovať, a jedinečná genetika každej mačky činia absolútne výroky nerozumými. (čítajte tu) Len málo vecí v medicíne je absolútnych.
Ako dlho po tejto mutácii môže moja mačka ochorieť?
Už som spomenul, že drvivá väčšina mačiek, ktoré sú vystavené bežnému mačaciemu koronavírusu, nikdy vážne neochorela. Keď vírus zostane v črevách vašej mačky, kam patrí, najčstejšie môžete zaznamenať iba krátke obdobie mäkkej stolice alebo hnačky. Infekcia črevnej výstelky mačky (jej enterocytov) s najväčšou pravdepodobnosťou nastáva bezprostredne po požití koronavírusu mačkou. Kým však bude v laboratórnych testoch detegovaný dostatočný počet vírusov, môže uplynúť niekoľko dní. (čítajte tu) Po tejto počiatočnej infekcii sa zdá, že väčšina mačiek eliminuje vírus zo svojho tela pomerne rýchlo. Niektoré mačky sa však stávajú prerušovanými alebo trvalými prenášačmi nemutovanej formy vírusu a u niekoľkých z nich sa vyvinie FIP. (čítajte tu)
Čas, ktorý uplynie od infekcie miernou formou koronavírusu, po možnú mutáciu a prípadné vypuknutie FIP, je veľmi variabilný. Bolo by veľmi ťažké navrhnúť platné štúdie, ktoré by sa týmto zaoberali. V laboratóriu sa ochorenie súvisiace s FIP môže začať v priebehu niekoľkých týždňov. Ale práve vtedy sa už mutovaný vírus FIP experimentálne prenesie z mačky na mačku. Okrem laboratórneho prostredia a „účelovo chovaných“ mačiek nám to hovorí len málo o tom, čo sa deje v skutočnom svete. Veterinári skutočne nevedia, aká je dynamika FIP v domácej alebo chovateľskej situácii, keď sú prítomné „divoké“ kmene vírusu a geneticky rozmanité mačky. Medzi dobou, kedy bola mačka pravdepodobne vystavená „divokému“ koronavírusu, a okamihom, kedy začne prejavovať známky ochorenia, často dochádza k dlhým prestávkam – niekoľko mesiacov alebo dokonca rokov. Ako som už spomenul, mnoho veterinárov spája vznik FIP so stresom alebo traumou. Faktory ako preplnenosť, častá gravidita, genetická predispozícia, príbuzenská plemenitba a chirurgické zákroky boli diskutované ako spúšťače, ktoré by mohli narušiť rovnováhu v prospech vírusu FIP. To je pre mňa obzvlášť smutné, pretože keď mačka ochorie, moji klienti sú už na ňu emocionálne naviazaní.
Aké sú príznaky FIP?
Spomenul som, že počiatočné príznaky FIP sú často nevýrazné a dajú sa ľahko prehliadnuť. Letargia, drsná srsť, malý záujem o úpravu alebo hranie, zvýšená spavosť, vyberavosť v jedle a chudnutie sú často prvým dôvodom, k návšteve veterinára. Tieto príznaky však môžu mať aj mnohé ďalšie príčiny.
Počas veterinárnej prehliadky je bežné, že mačky FIP majú nízke teploty. Pamätajte však na to, že normálne mačky často majú mierne horúčky kvôli cestovaniu, stresu, strachu alebo manipulácii cudzími ľuďmi. Možno ste recepčnému spomenuli, že vaša mačka má viac poblémov na toalete. Choré mačky sa menej starajú o svoju hygienu. Váš veterinár by preto mohol mať podozrenie na bakteriálnu infekciu a liečiť mačku antibiotikami. Ale antibiotiká tieto horúčky neznížia. Keď tieto mačky bojujú s vírusom FIP dlhšie, je bežné, že sa stanú anemickými (neregeneratívna anémia = v ich krvi je prítomných príliš málo retikulocytov).
Príznaky efuzívnej (vlhkej) formy FIP
Keď mačka už prešla do efuzívnej vlhkej formy FIP, mediátorové zlúčeniny (zápalové cytokíny) uvoľňované mačacím imunitným systémom majú za následok zápal ciev na vonkajších povrchoch telesných orgánov (polyserozitída). (čítajte tu) Keď k tomu dôjde v bruchu, mačkám sa vyvinie tekutinou naplnené, zväčšené brucho v tvare hrušky. Keď k tomu dôjde v hrudníku (hrudníku), dýchanie sa stane namáhavým. Keď tekutinu akumuluje brucho vašej mačky, jej hmotnosť sa nemusí zmeniť, a to ani v prípade, že ide o poriadneho jedlíka. Je to kvôli hmotnosti prebytočnej tekutiny v bruchu. Keď však prstom prejdete po mačacej chrbtici, všimnete si, že je kostnatá a mnohé mačky stratili aj svalovú hmotu nôh. Tento stav sprevádza malátnosť a kachexia.
Príznaky neefuzívnej suchej formy FIP
Pri tejto menej bežnej neefuzívnej (= granulomatóznej FIP) tekutiny nemajú tendenciu sa hromadiť v hrudníku alebo bruchu vašej mačky. Táto forma FIP sa tiež vyvíja pomalšie. Neefuzívna, suchá forma FIP je tiež pravdepodobnejšie ako vlhká forma spočiatku zamieňaná s chorobami inými ako FIP, ktoré vykazujú podobné príznaky. Neurologické zdravotné problémy, ako je epilepsia, záchvaty, chvenie, problémy s rovnováhou, zmeny osobnosti alebo zvýšená citlivosť na dotyk vyplývajúce z FIP, je možné ľahko zameniť s inými príčinami. Rovnako tak problémy so zrakom. Je bežné, že suchá forma FIP postihuje nervy a mozog. Ale môžu byť ovplyvnené aj ďalšie orgány: oko (oči) (čítajte tu), pečeň, obličky, dýchacie cesty (čítajte tu) črevný trakt, koža. (čítajte tu)
Aké ďalšie choroby je možné zameniť s FIP?
Medzi choroby, ktoré je možné zameniť za FIP patria toxoplazmóza, kryptokokóza, hemobartonella, infekcie stredného ucha, trauma, lieková intoxikácia, lymfóm, FeLV, FIV a nádory. Príležitostne mačky vykazujú príznaky efuzívnej aj neefuzívnej formy. (čítajte tu)
Ako môj veterinár potvrdí, že moja mačka má FIP?
Vlhká forma FIP je pre vášho veterinára relatívne jednoduchá. Mladé mačky, ktoré prichádzajú s miernymi horúčkami a hromadením tekutín v hrudníku alebo bruchu alebo v oboch, pravdepodobne trpia touto chorobou. Vzorky krvi, ktoré dostane váš veterinár, zvyčajne vykazujú miernu až stredne závažnú anémiu. Hladiny albumínu v krvi sú často nízke, pomery A: G sú nízke, hladiny globulínu v krvi sú vysoké, čo dáva pomer albumínu k globulínu <0,6. Tento test však slúži viac ako vylučovací test, než ako test potvrdzujúci diagózu FIP. (čítajte tu) Celkový počet lymfocytov je často nízky a počet neutrofilov zvýšený. Vyšetrenie špecifickej hmotnosti tekutiny potvrdzuje, že ide o exsudát (> 1030).
Keď sa u mačky vyvinie suchá forma FIP, diagnostika je oveľa náročnejšia. Vysoké hladiny globulínu v krvi (hyperglobulinémia) – často v kombinácii s nízkymi hladinami albumínu v krvi naznačujú FIP. Biopsie tkanív môžu síce s istotou potvrdiť chorobu, ale ich realizácia je často náročná alebo nemožná. Vyspelé diagnostické centrá využívajú užitočné nástroje pre zobrazovanie magnetickou rezonanciou (MRI) a analýzu CSF. (čítajte tu a tu)
Väčšina veterinárov stanoví diagnózu FIP u suchej forme na základe prevahy dôkazov, nie 100% istoty. Prevaha je veľmi relatívny pojem a pravdepodobne zodpovedá za zázračné lieky FIP, o ktorých sa niekedy hovorí. Len preto, že mačka je pozitívna na koronavírus a má niektoré z bežných symptómov suchej formy FIP, neznamená to, že má FIP. Žiadny z bežnejších testov samotných nemôže potvrdiť, že mačka má suchú formu FIP. Ale niekoľko testov spolu s príznakmi, ktoré vaša mačka vykazuje, zvyčajne postačuje na to, aby váš veterinár dospel rozumnej diagnóze. Dokonca ani prítomnosť alebo neprítomnosť protilátkok proti koronavírusu alebo samotného vírusu je nedostatočná, pretože takto sa javí aj mnoho zdravých mačiek, takže hladiny protilátok proti vírusu a proti koronavírusu nekorešpondujú dobre s ochorením FIP.
Niektorí, vrátane Idexx Laboratories, sa domnievajú, že vysoké titre protilátok FCoV zvyšujú podozrenie na FIP. V roku 2014 spoločnosť predstavila svoj test FIP Virus RealPCR ™, ktorý tvrdil, že dokáže rozpoznať (odlíšiť) obyčajný koronavírus FCoV od mutovaného koronavírusu FIP. Test bol navrhnutý na základe niektorých nemeckých štúdií. (čítajte tu, tu a tu) Napriek niektoré novšie štúdie, ktoré spoločnosť nesponzorovala, vyvolali značnú pochybnosť o hodnote ich patentovaného testu. (čítajte tu)
Inhibítory proteázy a podobné zlúčeniny sú jediné lieky, ktoré v súčasnosti ponúkajú nádej mačkám, ktoré bojujú s FIP. Ich existencia sa datuje od štúdií uskutočnených na začiatku 90. rokov minulého storočia s cieľom skríningu liekov na ich schopnosť liečiť ľudskú hepatitídu C a potláčať ľudský AIDS. Neskôr výskum podnietila výskum epidémia koronavírusu SARS z roku 2003. Všeobecný záujem o antivírusové lieky motivoval veterinárnu školu na Manhattane v Kansase, aby preskúmala niektoré z týchto zlúčenín. (čítajte tu) O niektorých sa už vedelo, že sú účinné proti koronavírusu. Keďže išlo o skupinu biochemikov na veterinárnej škole, ich záujem sa prirodzene obrátil na dovtedy neliečiteľný FIP koronavírus mačiek a mačací kalicivírus. V roku 2015 potvrdili, že z 13 skúmaných zlúčenín bolo niekoľko účinných proti mačaciemu koronavírusu. Medzi nimi bol GC-376. (čítajte tu) Tieto informácie sa dostali na veterinárnu školu v Davise v Kalifornii, kde veterinárny virológ, doktor Niels Pedersen, začal pokusy s podávaním GC376 mačkám vo vlastníctve klientov s mokrou alebo suchou formou FIP. (čítajte tu) Výsledky boli veľmi sľubné; aj keď sa liek zdal byť účinnejší pri liečbe vlhkej ako suchej formy ochorenia. V ďalšej štúdii z roku 2018 táto skupina v Davise v spolupráci s Gilead Sciences identifikovala ďalšiu úzko príbuznú zlúčeninu GS-441524, ktorá bola účinná aj proti FIP. (čítajte tu a tu) Patent na GS-441524 vlastní spoločnosť Gilead. Táto konkrétna zlúčenina je metabolitom jeho prekurzora remdesiviru (aka GS-5734), ktorý spoločnosť v súčasnosti predáva pre liečbu ľudského Covid-19. Väčšina informácií o použití Remdesiviru u mačiek sa šíri po internete. Na internete pravdepodobne existujú korektné, ale aj mylné rady. Ak potrebujete ďalšie informácie, kontaktujte spoločnosť Bova Australia.
GS-441524
Doktor Pedersen zdokumentoval účinnosť lieku v mnohých prípadoch. Problém bol v jeho získaní. Gilead je verejne obchodovaná spoločnosť. Akcionári očakávajú maximálny zisk. Spoločnosť argumentuje tým, že predaj výrobkov, ako je Remdesivir/Veklury® na humánne použitie, je omnoho výnosnejší, než liekov na veterinárne použitie. Ako som už spomenul, remdesivir je prekurzor alebo proliečivo, ktoré telo potom metabolizuje na GS-441524. Prekurzorová forma lieku mu pomôže vstúpiť do správnych buniek imunitného systému, kde sídlia imunosupresívne koronavírusy. V štúdiách dr. Pedersena na mačkách bol GS-441524 podávaný v nezmenenej forme FIP, s úspešnosťou doteraz nevídanou. Odmietnutie spoločnosti Gilead uvoľniť GS-441524 pre liečbu FIP u mačiek rýchlo viedlo k tomu, že sa zúfalí majitelia mačiek obrátili na čínske biochemické firmy na čiernom trhu, ktoré pôsobia v rozpore s medzinárodným patentovým právom.
GC376
V iných štúdiách na veterinárnych školách v Kansase a v Kalifornii sa zdá, že aj ďalšia podobná zlúčenina – inhibítor proteázy, GC376, pomáha mačkám infikovaným vírusom FIP. Zlúčenina s podobným potenciálom je GC373 (čítajte tu a tu) GC376 je licencovaná spoločnosťou s názvom Anivive Lifesciences. Neviem, aké sú ich marketingové plány s týmto liekom, ale spravidla vstupuje do hry maximalizácia zisku.
Jeden z čínskych dodávateľov liekov, MUTIAN Biotechnology Co. Ltd., so sídlom v Nantongu, predáva liek, ktorý nazýva Mutian® xraphconn. Keď som naposledy kontroloval ich webovú stránku, už nebol dostupný v kapsulárnej forme. Predtým však, v zozname neschválených liekov FDA, boli uvedené jeho účinné zložky ako: plodnica inonotus obliquus, nikotínamid ribotid, crocin, S-adenosylmethionin a pestrec mariánsky/silymarín inotodiol. Nič pravdepodobne nevylieči FIP. Bolo mi povedané, že tento výrobok bol predávaný ako „doplnok stravy určený výhradne pre mačky s FIP,“ pre posilnenie ich imunitného systému a celkovej pohody ”. Mutian je dostupný aj v injekčnej forme. Čo sa týka pravdepodobného zloženia týchto výrobkov pravdepodobne budete musieť ísť na webové stránky Sock FIP a FIP Warriors. Gilead ale má svoje podozrenia.
Bolo mi povedané, že injekčný roztok Mutian sa v jednom čase predával za približne 4000 dolárov pre mačku s hmotnosťou 6,6/3 kg. Priatelia v Rusku mi hovorili, že cena tam v roku 2021 klesla na 1000 dolárov. Je to pravdepodobne spôsobené konkurenčnými dodávateľmi v Číne, ale nemám žiadne bližšie informácie. Sock FIP a FIP Warriors by boli oveľa lepšími zdrojmi tohto druhu informácií. Spoločnosť Mutian prehlásila, že zloženie ich produktu je obchodným tajomstvom. Ale tiež som čítal, že Gilead, výrobca remdesiviru, ich žaloval za porušenie patentu. Majitelia mačiek si musia byť vedomí druhu osôb, s ktorými majú do činenia, ako aj možnosti, že by tieto lieky mohol v prípade odhalenia zaistiť colný úrad USA.
Je takmer isté, že v blízkej budúcnosti bude objavených viac antivírusových zlúčenín účinných pri liečbe mačiek pozitívnych na FIP. (čítajte tu a tu) Verím, že sa nejaké nájdu medzi inhibítormi 3CLpro. Spoločnosť Pfizer už dve z nich testuje na ľuďoch. Takže možnosti liečby pre majiteľov mačiek FIP+ by mali byť čoskoro oveľa väčšie. Neverím, že niektoré z týchto budúcich liekov budú lacné. Náklady však, dúfajme, výrazne klesnú, pretože jeden liek konkuruje druhému na trhu s liečbou ľudského koronavírusu.
Davis tiež uvažoval o lieku od spoločnosti Merck – MK-4482/EIDD-2801 (Molnupiravir®), vyvíjanom pre perorálne použitie proti koronavírusu. Neverím však, že by im vlastník patentu Merck tento liek sprístupnil. Môžem sa mýliť. Ale v apríli 2021 bola jedna z dvoch klinických skúšok tejto zlúčeniny u ľudí s ochorením Covid-19 zastavená pre jej neúčinnosť pri vážne chorých hospitalizovaných pacientoch. Na internete vidím, že pokusy s ľuďmi v menej závažných prípadoch ochorenia Covid-19 môžu pokračovať. Farmaceutické spoločnosti majú tendenciu byť veľmi obozretné, pokiaľ ide o zverejňovanie údajov – najmä ak sú negatívne a môžu ovplyvniť ceny ich akcií.
Žiadny z týchto liekov nie je úplne bez rizika. V mieste vpichu sa občas vyskytujú kožné reakcie, citlivosť a vredy. Zriedkavo boli vážne. Väčšina z toho môže byť spôsobená chybami v injekčnej technike. Menšie poškodenie obličiek bolo kedysi pripisované jednému z čínskych liekov. Závažnosť stavu vašej mačky v čase, keď sa tieto lieky začínajú podávať, tiež ovplyvňuje úspešnosť liečby. Niektoré z týchto mačiek vyžadujú infúznu terapiu. Keď sú prítomné sekundárne infekcie, je potrebné ich riešiť antibiotikami a výživovou podporou. Tieto opatrenia, ktoré môžu zahŕňať dokonca aj transfúziu krvi, môžu vašej mačke poskytnúť najlepšie šance na prežitie. Vždy je múdre vykonať úplnú analýzu krvi (CBC a biochémia vrátane pomeru A:G) krátko pred začiatkom liečby a pravidelne v jej priebehu. Umožňujú vášmu veterinárnemu lekárovi vedecky sledovať celkový zdravotný stav vašej mačky, a vyhodnotiť priebeh liečby. Dobrá chuť do jedla, návrat k normálnej hmotnosti vašej mačky a pomalý návrat jej starej veselej povahy je však vždy najlepším znamením. Ak mačka nechce jesť, je povolených niekoľko dní podávania kortikosteroidov (napr. Prednizolónu). K dispozícii sú nesteroidné stimulanty chuti do jedla, ako je Entyce®, ale netušíme, či interagujú negatívne s niektorým z týchto liekov. Ak ste ho používali tento liek alebo mirtazapín, dajte mi vedieť výsledok. Odstránenie výpotkovej tekutiny je žiaduce iba vtedy, keď má vplyv na schopnosť vašej mačky dýchať. Niektorí majitelia mačiek použivajú na podporu pečene alebo obličiek toniká, ako napríklad SAMe, silymarín/(pestrec mariánsky), S-adenosylmethionín, probiotiká, vitamín B3 atď. Žiadny z týchto produktov ale neovplyvňuje výsledky liečby.
Podľa doktora Pedersena a ďalších je u mačiek mladších ako sedem rokov väčšia pravdepodobnosť vyliečenia než u mačiek, u ktorých sa vyvinie FIP vo vyššom veku. A ako som už spomenul, mačky s vhkou formou FIP budú mať väčšiu pravdepodobnosť úspechu ako mačky so suchou formou – najmä tie, ktoré už majú neurologické a/alebo očné problémy. Tiež boli hlásené relapsy FIP po 12-týždňovom cykle GS-441524. Niekedy postačilo ďalších 8 týždňov užívania lieku, a niekedy nie. Niekedy sa mačky, u ktorých sa vyvinula neurologická forma (suchá forma) FIP, a boli úspešne liečené autentickým alebo čínskym GS-441524 na odstránenie vírusu FIPV, sa zo zdravotného postihnutia úplne nezotavili. To platí najmä vtedy, ak zahŕňa paralýzu a slabosť nôh v dôsledku poškodenia centrálneho nervového systému. Niektorí veria, že vyššia dávka lieku tomu môže zabrániť. Všeobecná však v medicíne platí, že periférne nervy (ruky, nohy atď.) sa často pomaly obnovujú: ale keď sú neuróny centrálneho nervového systému zničené, zmeny už môžu byť nevratné. (čítajte tu) Väčšina mačiek sa však zotaví – ak nie úplne, tak dostatočne na to, aby viedli budúci šťastný život.
Lieky s nepreukázaným účinkom
Spomenul som, že cytidínový nukleozidový analóg Molnupiravir (EIDD-2801), ktorý je alebo bol vyvíjaný spoločnosťou Merck pre závažné koronavírusové ochorenie u ľudí, môže byť účinný u mačiek s FIP. Zatiaľ to však ešte nevieme určite, alebo aspoň ja neviem.
Japonskí veterinári spravidla publikujú kvalitné veterinárne štúdie. Jeden veterinár v Japonsku si myslel, že kombinácia lieku proti reumatoidnej artritíde, Humira® v kombinácii s liekom proti plesniam, itrakonazolom, môže byť pre mačky FIP určitým prínosom. (čítajte tu) Možno sa to ukáže ako užitočné, možno nie. Neviem o žiadnych kontrolovaných štúdiách. Itrakonazole sa u mačiek primárne používa na liečbu ťažkých kožných ochorení.
Kurkumín
Kurkumín sa získava z korenia, kurkumy. Predáva sa v obchodoch so zdravou výživou s rôznymi tvrdeniami o prospešnosti pre zdravie. Jedna štúdia z roku 2020 uviedla, že kurkumín mal laboratórne supresívne účinky na vírus FIP. Nikdy sa však nedostali k tomu, aby to vyskúšali v mačkách FIP+. (čítajte tu) Kurkumín získava veľkú slávu. Pokiaľ však viem, nikdy sa nezistilo, že by bol prospešný alebo liečivý pre akúkoľvek ľudskú chorobu. (čítajte tu) Skutočne nemáme predstavu, čo by vôbec mohol ponúknuť mačkám pozitívnym na FIP.
Meflochín
V roku 2020 štyria veterinári z University v Sydney, ktorí hľadali možnosti liečby FIP, skúmali, ako mačky metabolizujú zlúčeninu meflochín používanú na liečbu ľudskej malárie. (čítajte tu) V USA sa predáva ako Lariam®. O liek prejavili záujem, pretože predchádzajúca štúdia ukázala, že je účinný proti mačaciemu koronavírusu. (čítajte tu) Neviem, či tieto štúdie pokračujú. V Rusku sa začali aj klinické skúšky s cieľom zistiť, či by liek mohol byť prospešný pre pacientov s Covid-19. Neboli oznámené žiadne výsledky.
Liečba, ktorej nedôverujem
Mnoho rokov sa domnievam, že príležitostne sa objavujúce „lieky“ proti FIP pravdepodobne predstavujú prípady, keď mačky mali iba nefatálnu črevnú formu koronavírusu, ale vykazovali znaky podobné FIP z dôvodu niektorých ďalších nerozpoznaných zdravotných problémov. V žiadnej správe, o ktorej viem, nebolo nikdy overené, že koronavírus opustil črevo a napadol telo mačky. (tropizmus monocytov/makrofágov). To sa musí stať, kým sa u mačky vyvinie FIP.
Doxycyklín
Niektorí tvrdia, že doxycyklínové antibiotikum s prednizolónom alebo bez neho je prospešné pre mačky FIP+. Doxycyklín je vhodné antibiotikum na sekundárne bakteriálne infekcie, s ktorými sa môže vaša FIP mačka stretnúť. Je to tiež skvelý liek na liečbu hemobartonelly, ktorý môžu mať niektoré mačky pozitívne na FIP. Ale nikto nikdy nepotvrdil, že má nejaký vplyv na vírus FIP. Ak svojej mačke podávate doxycyklín v kapsulárnej alebo tabletovej forme z akéhokoľvek dôvodu, vždy ho podávajte s dostatočným množstvom vody alebo kúskom mäkkej stravy, pretože sa môže usadiť v pažeráku vašej mačky a spôsobiť škody. To je dobrý prístup, keď dávate mačke akýkoľvek druh pilulky.
Prednizolón a iné kortikosteroidy
Je pravda, že prednizolón a jemu podobné zlúčeniny (kortikosteroidy) zmierňujú zápal. Nikdy sa však nepreukázalo, že by ovplyvňovali zostupnú špirálu FIP. Kortikosteroidy sú však vynikajúcim stimulátorom chuti do jedla a pozitívnej nálady, a v niektorých prípadoch dodávajú mačkám pozitívnym na FIP krátku dávku energie a motivácie. Podobné účinky sa vyskytujú u ľudí. (čítajte tu) Nie je preto na škodu podávať ich niekoľko dní pod dohľadom veterinárneho lekára.
Paradoxne, zatiaľ čo niektorí veterinári sa pokúšajú stimulovať imunitný systém vašej FIP mačky liekmi, ako je interferón a polyprenyl imunostimulant, iní podávajú kortikosteroidy ako prednizolón alebo dexametazón na oslabenie imunitného systému mačky.
V roku 1996 zakladatelia ruskej začínajúcej spoločnosti Micro-plus publikovali článok o úžasných schopnostiach ich zlúčeniny, polyprenylfosfátu (phosprenyl, alias fosprenil), liečiť široké spektrum chorôb. Tvrdili, že je „vysoko účinný“ pri liečbe besnoty, rakoviny, psinky, hepatitídy, enteritídy (parvo?) a potenciálne užitočný pri liečbe ľudského HIV a ľudského herpesu. Na zlúčeninu získali ruský patent. Polyprenyl imunostimulant (PI) sa stále bežne predáva v ruských obchodoch s domácimi zvieratami, kde sa používa na liečbu čohokoľvek.
Ruský veterinár o Phosprenyle {2013 )
Zostávam skeptický k tomu, že polyprenyl imunostimulant má pre vašu mačku nejakú hodnotu. Naposledy sa o lektvare s tak širokými účinkami zmieňoval Mithridatesom Veľký v roku 100 pred n.l. Ak chcete, prečítajte si viac o Veľkom Theriaku. Napriek tomu v roku 2009 veterinári na univerzite v Tennessee uviedli, že PI zrejme prospieva niekoľkým mačkám, u ktorých sa predpokladalo, že majú suchú formu FIP. (čítajte tu) Prirodzene, každý bol nadšený a plný nádeje. Finančne prispela dokonca aj Nadácia Winn Feline. Ale od tohto počiatočného oznámenia v roku 2009 neviem o žiadnych ďalších publikáciách o tomto lieku v humánnej alebo zvieracej medicíne. Účinné lieky, ktoré veterinári a majitelia mačiek tak naliehavo potrebujú, sa spravidla uchytia oveľa rýchlejšie.
Mačací interferón Omega
Interferóny hrajú úlohu v prirodzenej odolnosti vašej mačky voči koróne a iným vírusom. (čítajte tu) Takže by sa dalo predpokladať, že podávanie interferónu mačkám s FIP by im mohlo pomôcť. Raz to naznačila japonská štúdia. (čítajte tu) Bola to však zle postavená štúdia. Liečených a pozorovaných bolo iba niekoľko zvierat a nikdy nebol predložený dôkaz, že niektorá z mačiek trpela FIP. Ale keďže veterinári mali vtedy tak málo, čo by mohli ponúknuť mačkám s FIP, spôsobilo to vtedy veľa vzrušenia.
Novšia nemecká štúdia zistila, že podávanie mačacieho interferónu nemalo žiadny vplyv na dĺžku života študovaných mačky infikovaných FIP, a ani na kvalitu ich života. (čítajte tu) Môžete samozrejme tvrdiť,, že Nemci nepodávali interferón v dostatočných dávkach, alebo ho podávali nesprávnym spôsobom alebo ho podali v zlom štádiu choroby atď. Stále teda existujú veterinári, ktorí ho podávajú alebo doporučujú. Európska divízia spoločnosti Virbac Corporation stále predáva rekombinantný produkt mačacieho interferónu (Virbagen Omega®). V súčasnej dobe sa v USA nepredáva, ale niektorým majiteľom severoamerických mačiek sa ho podarilo zohnať. Britský veterinár zverejnil v roku 2020 článok, ktorý naznačoval, že jeho použitie bolo prospešné pri liečbe mačky infikovanej suchou formou FIP. Okrem interferónu omega však mačka dostávala čínsky liek Mutian. (čítajte tu) Moje presvedčenie, presvedčenie NIH a ďalších je, že tieto komerčne dostupné interferónové produkty nemajú schopnosť liečiť koronavírus a pravdepodobne ani priebeh FIP, FeLV alebo FIV. (čítajte tu a tu a tu) Ďalší s podobnými tvrdeniami, Feliferon®, sa predáva v Rusku. Netuším, čo v ňom je.
Alternatívna a komplementárna medicína
Zúfalstvo jednej osoby je príležitosťou inej osoby. Vždy existovali a vždy budú bylinkári, naturopati, praktici obskurného umenia a dokonca aj niekoľko veterinárnych lekárov, ktorí budú tvrdiť, že dokážu vyliečiť nevyliečiteľné choroby. Vaše nádeje vzbudia tým, že vám povedia, čo chcete počuť; a potom, keď peniaze zmenia majiteľa, vás sklamú. Tragédia a strata sú bolestivé pre každého z nás. Ale falošné očakávania neodďaľujú nevyhnutné. Tieto možnosti len poskytujú falošný pocit pohodlia, podpory a útechy niektorým majiteľom mačiek, ktoré čelia FIP. Títo majitelia mačiek by mali mať právo ich používať, ak si to želajú
Čomu veriť? Na aké informácie sa môžem spoľahnúť?
Či môžete dôverovať mojim informáciám, je niečo, čo si budete musieť rozhodnúť sami. Ale vo všeobecnosti beriem svoje informácie zo skupiny v Davise v Kalifornii pod vedením doktora Nielsa Pedersena. Za tie roky som sa naučil dôverovať jemu a publikáciám a úsudkom z UC Davis. Rovnako dôveryhodné sú informácie pochádzajúce od Cornell. Keď hodnotím kvalitu výskumnej práce a jej závery, vždy kontrolujem, kto ju zaplatil a povesť časopisu, v ktorom bol uverejnený. Tiež zvažujem, kto bude mať z týchto zistení finančný prospech. Môžete nájsť vedecký časopis, ktorý bude v dnešnej dobe publikovať takmer čokoľvek. Tieto dve veterinárne vysoké školy v USA a britská Kráľovská veterinárna akadémia (RVC) sa z roka na rok umiestňujú na prvých troch miestach. Ďalšou veterinárnou inštitúciou s veľmi vysokými štandardmi je veterinárna škola v Utrechte.
V RVC neexistuje konsenzus o tom, čo je v súčasnej dobe možné urobiť pre mačky s FIP. Ani o tom, čo predstavuje dostatočne platnú diagnózu suchej formy FIP, ani o liečbe ktorejkoľvek formy po prijatí diagnózy. Niektorí lekári stále odporúčajú kombináciu interferónu a prednizolónu. Iní neveria ani jednému. Kým sa nestali známe výsledky štúdií z UC Davis, väčšina veterinárov v inštitúcii podľa potreby odsávali pleurálne (hrudníkové) výpotky a robili čokoľvek, o čom si mysleli, že by mačke mohlo urobiť lepšie. Ponúkali útechu majiteľom mačiek, ako aj mačkám samotným a prípadnú eutanáziu.
Bolo mi povedané, že teraz už väčšina veterinárov v RVC pravdepodobne majiteľov mačiek upozorní na webovú stránku FIP Warriors – s varovaním, že môžu minúť veľa peňazí a že liek, ktorý dostanú, nemusí byť taký, ako si mysleli, že zaplatili. Predpisy a zmýšľanie v Británii sú také, že väčšina veterinárov tam váha s priamym zapojením zo strachu, že by mohli byť „vyškrtnutí z registra“ (strata licencie). Niektorí veterinári teda ani nespomínajú Čínu. Tí, s ktorými som hovoril, ako aj UC Davis, sú proti nasadeniu týchto čínskych liekov v snahe dosiahnuť chovy negatívne na koronavírus kvôli strachu zo vzniku kmeňov FIP odolných voči liekom, ktoré už nebudú reagovať na GS-441524 a podobné lieky. Súhlasím. Niektorí majú o tom menej výhrad. (čítajte tu)
V RVC sú aj veterinári, ktorí spochybňujú pravdepodobnosť, že každý bežný mačací koronavírus má schopnosť mutovať na variant FIPV. To je súčasná teória akceptovaná tu v Amerike a tá, ktorú som vám prezentoval. Títo veterinári z Veľkej Británie sa zaujímajú, aké sú šance na to, aby sa rovnaká mutácia opakovala znova a znova u rôznych mačiek? A pýtajú sa „nie je oveľa pravdepodobnejšie, že u mačiek existuje niekoľko rôznych foriem koronavírusu a iba jeden vírus (alebo skupina príbuzných vírusov) má schopnosť spôsobiť FIP?“ Neviem odpoveď.
Môže byť moja mačka očkovaná proti FIP?
Áno
Zoetis vyrába vakcínu proti FIP, Felocell FIP (IN). Je to očkovacia látka, ktorá sa podáva do nosa mačiek. Spoločnosť navrhuje, aby sa podával iba mačkám vo veku 16 týždňov alebo starším ako „pomoc“ pri prevencii choroby. Obsahuje oslabený vírus FIP. Verí sa, že tento konkrétny kmeň vírusu neprežije pri jadrovej (vnútornej) telesnej teplote mačky a proliferuje iba v horných dýchacích cestách a nose mačky, kde je pravdepodobne neškodný.
Neexistuje dostatok údajov na to, aby sa dalo prehlásiť, či táto vakcína má nejaké praktické použitie pre ochranu vašich mačiek. Za prvé, mnohí veria, že väčšina mačiek je exponovaná mačaciemu koronavírusu pred dosiahnutím veku 16 týždňov – keď sú ešte príliš mladé na to, aby dostali očkovaciu látku, ktorá produkuje protilátky proti koronavírusu. Nevieme však, ako dlho tieto protilátky trvajú, alebo či sú v prevencii FIP účinnejšie ako protilátky, ktoré už väčšina mačiek vystavených koronavírusu nesie. Existujú aj veterinári, ktorí sa obávajú, že protilátky ničia tkanivo u mačiek infikovaných FIP, a že stimulácia produkcie protilátok môže byť negatívnou udalosťou. Niektoré rané štúdie dospeli k záveru, že vakcína je prospešná (čítajte tu), zatiaľ čo iné nie. (čítajte tu) Ak sa rozhodnete nechať mačku očkovať touto vakcínou, bolo by vhodné vedieť, či už má v krvi protilátky proti koronavírusu v dôsledku predchádzajúcej expozície mačaciemu koronavírusu. V týchto situáciách je nepravdepodobné, že by vakcína bola prospešná. (čítajte tu)
Mám viac mačiek. Čo mám robiť, aby som ich ochránil, ak u jednej prepukne FIP?
Spravidla neodporúčam izolovať mačku, ktorá je chorá, zo stabilnej domácnosti s viacerými mačkami. Pozorujte ju, uistite sa, že nie je v čase kŕmenia šikanovaná, splňte jej špeciálne potreby, ak k nim dôjde, ale oddelenie od spolubývajúcich a zmeny v domácnosti môžu byť pre mnohé mačky ďalším stresom. Za predpokladu, že je teória mutácií správna, ak vaša rodina mačiek nejaký čas existuje spolu, všetky mačky už boli vystavené mačaciemu koronavírusu, a sú imúnni alebo možno zdraví nosiči nemutovanej formy vírusu FCoV. Pokúste sa o zníženie konfliktov medzi mačkami. Chovateľské stanice by mali zvážiť prestávku v chove a mať na pamäti, že súrodenci mačiek FIP+ sú vystavení väčšiemu riziku vzniku tejto choroby. V týchto situáciách by sa malo zvážiť aj vyhýbanie sa stresu spojenému s kastráciou, preplnenosťou, predajom alebo zbytočným očkovaním.
Veterinárna škola University of Colorado má v stave zamestnancov filozofa Bernarda Rollina. Varuje pred tým, aby boli trpiace zvieratá príliš dlho nažive. Napísal článok, ktorý sa týkal problémov konca života u starých mačiek, ale mnohé platí aj pre situáciu mačky s FIP. Jeho a moje presvedčenie je, že pri rozhodovaní o ukončení života vašej mačky dlhujete svojmu priateľovi, aby si vybral to, čo mu spôsobí najmenšiu bolesť a utrpenie, aj keď to pre vás znamená bezprostrednejšiu bolesť a smútok. Článok si môžete prečítať tu. Ak chcete, prečítajte si moje myšlienky o strate domácich zvierat tu. Za tie roky mi veľa ľudí napísalo, že si dávajú za vinu, že niečo, čo urobili alebo neurobili, spôsobilo stratu ich mačky. To platí ale len zriedka, a nikdy nie, pokiaľ ide o FIP.
Sarah Jones 1, Wendy Novicoff 2, Julie Nadeau 3 a Samantha Evans 1,*
1 Katedra veterinárnych biologických vied, Vysoká škola veterinárnej medicíny, Štátna univerzita v Ohiu, Columbus, OH 43210, USA 2 Oddelenia ortopedickej chirurgie a vied o verejnom zdraví, Lekárska fakulta, University of Virginia, Charlottesville, VA 22903, USA 3 Veterinárna pohotovostná klinika Hamilton Region, Hamilton, ON L8P 4W3, Kanada * Autor, ktorému by mala byť adresovaná korešpondencia.
Akademický redaktor: Clive J. C. Phillips Animals 2021, 11 (8), 2257; https://doi.org/10.3390/ani11082257 Doručené: 22. apríla 2021 / Revidované: 29. mája 2021 / Akceptované: 27. júla 2021 / Zverejnené: 30. júla 2021
Infekčná peritonitída mačiek (FIP) je smrteľné ochorenie mačiek spôsobené mačacím koronavírusom. Cieľom tejto štúdie bolo formálne vyhodnotiť podávanie nelicencovanej antivírusovej terapie GS-441524 zo skupinových zdrojov pre mačky s podozrením na infekčnú peritonitídu mačiek (FIP). Členovia podporných skupín na sociálnych sieťach a skupín distribútorov liekov na báze GS-441524 boli dotazovaní prostredníctvom internetu. Z 393 analyzovaných prieskumov, ktoré spĺňali kritériá zaradenia, bolo 73,7% vlastníkov využívajúcich túto terapiu zo Spojených štátov. Iba 8,7% majiteľov uviedlo, že pri liečbe svojej mačky sa im dostalo výraznej pomoci od ich veterinárneho lekára. Priemerné náklady na liečbu boli 4920 USD. Väčšina majiteľov (88,2%) hlásila znateľné zlepšenie klinických príznakov do jedného týždňa od začiatku terapie. V čase prieskumu žilo 96,7% (380 mačiek), pričom 54,0% z nich bolo považovaných za vyliečené a ďalších 43,3% bolo monitorovaných v 12-týždňovom období pozorovania. Celkovo u 12,7% mačiek došlo k relapsu klinických príznakov FIP a 3,3% mačiek uhynulo napriek terapii GS-441524. Hlásené komplikácie väčšinou súviseli s podávaním subkutánnych injekcií kyslého roztoku GS-441524 majiteľom, ako je vokalizácia, bolesť, zápasenie a rany v mieste vpichu. Obmedzenia tejto štúdie zahŕňajú retrospektívny dizajn, zaujatosť pri výbere prípadov, spoliehanie sa na údaje oznámené vlastníkom a neschopnosť potvrdiť obsah nelicencovaných liečiv; zo skúseností týchto majiteľov sa však dá vyvodiť dôležité ponaučenie. Aj keď je to nekonvenčné a určite nie bez zdravotných a právnych rizík, nelicencovaná, domáca terapia podobná GS-441524, podľa informácií od majiteľov, môže očividne priniesť výhody pri liečbe mačiek so suspektnou diagnózou FIP.
Abstrakt
Cieľom tejto štúdie bolo formálne vyhodnotiť podávanie nelicencovanej antivírusovej terapie podobnej GS-441524 zo skupinových zdrojov pre mačky s podozrením na infekčnú peritonitídu mačiek (FIP), donedávna smrteľné ochorenie. Členovia podporných FIP skupín na sociálnych sieťach a skupín distribútorov liekov s GS-441524 boli dotazovaní prostredníctvom internetu. Prieskum bol zameraný na majiteľov, ktorí liečili svoje mačky najmenej 12 týždňov nelicencovanými liekmi s GS-441524. Z 393 analyzovaných ankiet, ktoré spĺňali kritériá pre zaradenie, bolo 73,7% vlastníkov využívajúcich túto terapiu zo Spojených štátov. Len 8,7% majiteľov uviedlo, že im pri poskytovaní liečby ich mačke pomáhal veterinár. Priemerné náklady na liečbu boli 4920 USD. Väčšina majiteľov (88,2%) hlásila znateľné zlepšenie klinických príznakov do jedného týždňa od začiatku terapie. V čase prieskumu žilo 96,7% (380 mačiek), pričom 54,0% z nich bolo považovaných za vyliečených a ďalších 43,3% bolo monitorovaných v 12-týždňovom období pozorovania. Celkovo u 12,7% mačiek došlo k relapsu klinických príznakov FIP a 3,3% mačiek uhynulo napriek terapii GS-441524. Hlásené komplikácie väčšinou súviseli s podávaním subkutánnych injekcií kyslého roztoku GS-441525 majiteľom, ako je vokalizácia, bolesť, ťažkosti a rany v mieste vpichu. Obmedzenia tejto štúdie zahŕňajú retrospektívny dizajn, zaujatosť pri výbere prípadov, spoliehanie sa na údaje oznámené vlastníkom a neschopnosť potvrdiť obsah nelicencovaných liečiv; zo skúseností týchto majiteľov sa však dá vyvodiť dôležité ponaučenie. Aj keď sa jedná o nekonvenčnú a určite nie bez zdravotných a právnych rizík, nelicencovanú, domácu terapiu s GS-441524, podľa správ majiteľov, môže očividne priniesť výhody pri liečbe mačiek s podozrením na FIP.
Kľúčové slová: FIP; GS-441524; COVID-19; čierny trh; koronavírus; mačka; remdesivir
Úvod
Od marca 2020 sa šírenie koronavírusu známeho ako SARS-CoV2 vyvinulo do globálnej pandémie COVID-19. Podobný, ale pre mačky špecifický vírus známy ako mačací koronavírus (FCoV) je pôvodcom smrteľného ochorenia mačiek známeho ako infekčná peritonitída mačiek (FIP). Antivírusové lieky, ktoré inhibujú replikáciu vírusovej RNA, ponúkajú potenciálne terapeutické a preventívne výhody pre COVID-19, vrátane proliečiva adenozínového nukleozidového monofosfátu GS-5734, bežnejšie známeho ako remdesivir (na trhu Gilead Sciences, Inc. (Foster City, CA, USA) ) [1]. Štúdia z roku 2018 publikovaná Murphyom a kol. preukázala, že GS-441524, menej chemicky komplexný rodičovský nukleozid (tiež patentovaný spoločnosťou Gilead), bol vysoko účinný proti experimentálne vyvolanej FIP v dávke 4,0 mg/kg subkutánne každých 24 hodín počas 12 týždňov (84 dní) u 10 laboratórnych mačiek [2]. Neskôr v roku 2019 rovnaká skupina uskutočnila klinickú štúdiu s použitím GS-441524 pre liečbu 31 mačiek vo vlastníctve klientov s FIP a výsledky naznačili, že toto kedysi smrteľné ochorenie je pomocou tohto nukleozidového analógu klinicky reverzibilné [3]. Názov zlúčeniny GS-441524 je (2R, 3R, 4S, 5R) -2- (4-aminopyrrolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-7-yl) -3,4-dihydroxy -5- (hydroxymetyl) tetrahydrofuran-2-karbonitril, ktorý je známy mnohými ďalšími synonymami [4]. Pre stručnosť tejto správy uvádzame viacero nelicencovaných liekových formulácií, ktoré tvrdia, že obsahujú túto zlúčeninu ako „podobné GS-441524“, aj keď ich nevyrába spoločnosť Gilead Sciences.
FCoV (mačací koronavírus) je extrémne bežný vírus, ktorý je celosvetovo považovaný za všadeprítomný [5], pričom séroprevalencia je medzi 26 až 87% (v závislosti od štúdie a regiónu sveta) u mačiek pochádzajúcich z prostredia s vysokou koncentráciou mačiek (chovateľské stanice alebo chovatelia a útulky pre zvieratá) [6]. Aktívne infekcie FCoV spôsobujú u väčšiny pacientov mierne až subklinické prechodné GI infekcie [7,8]. Zatiaľ čo 70% týchto mačiek je prechodne infikovaných FCoV, 13% zostáva trvalo infikovaných a chronicky vylučuje vírus do svojich výkalov [9]. FIP vzniká z mutovanej formy FCoV u približne 5% týchto mačiek [8] a odhaduje sa, že každoročne zabije 0,3 až 1,4% mačiek na celom svete [3]. Dve hlavné klinické formy FIP zahrnujú efuzívnu („vlhkú“) formu, pri ktorej sa u pacienta objavujú výpotky v telesných dutinách, a neefuzívnu („suchú“) formu. Až donedávna bol vývoj FIP u mačiek jednotne smrteľný a často bolo náročné dôjsť k presnej diagnóze antemortem (pred smrťou) [10].
Pravdepodobne kvôli ambícii pokračovať vo výskume ľudských RNA vírusov, ktoré by mohli byť inhibované GS-441524, Gilead zastavil ďalší vývoj terapie GS-441524 u mačiek. To vyvolalo dopyt po GS-441524 u majiteľov mačiek, ktorých mačkám diagnostikovali FIP, a čelili tak istej smrti. Výsledkom je, že viacerí výrobcovia nelicencovaných liekov (niekedy tiež označovaní ako „čierny trh“) začali predávať túto zlúčeninu majiteľom mačiek cez internet, čo v súčasnosti nie je podľa amerického patentu povolené spoločnosťou Gilead Sciences [4]. Evolúcia pokračovala do rozsiahlej online siete na liečbu a podporu FIP, založenej na crowd-sourcingu, vo veterinárnej medicíne v doteraz nevídanom rozsahu. V súčasnosti na sociálnych sieťach existuje niekoľko veľkých skupín, ktoré pomáhajú majiteľom mačiek získavať lieky s GS-441524, plánovať protokol a liečiť svoje mačky s podozrením na FIP. Pretože GS-441524 zostáva nelicencovanou terapiou v USA aj inde vo svete, väčšina tohto lieku sa vyrába, nakupuje, podáva a monitoruje bez veľkého, ak vôbec nejakého, veterinárneho dohľadu.
Cieľom tejto štúdie bolo formálne vyhodnotiť podávanie tejto nelicencovanej terapie pre FIP z rôznych zdrojov a určiť, ktoré faktory môžu viesť k úspechu liečby. Za týmto účelom sme uskutočnili prieskum u členov najväčšej z vyššie uvedených skupín na sociálnych sieťach a skupín distribúcie liekov s GS-441524. To, čo sme objavili, bolo skutočne ohromujúce; Nielenže sa laici sa u svojich mačiek rutinne pokúšajú o túto terapiu, ale podľa údajov uvádzaných vlastníkmi je účinná a vedie k vyliečeniu. V tejto správe sú analyzované ďalšie charakteristiky pacientov, liečby a výsledkov.
Materiály a metódy
Dotazník bol vytvorený prostredníctvom Google Forms (docs.google.com/forms). Dotazník bol rozosielaný na prominentnej stránke skupiny na sociálnej sieti („FIP Warriors“) venovanej liečbe a distribúcii GS-441524. Bol inzerovaný a zameraný na majiteľov mačiek s podozrením na FIP (na základe variabilných kritérií používaných ich jednotlivými veterinárnymi lekármi) a boli absolvovali aspoň určitú liečbu GS-441524. Niektorí z týchto pacientov absolvovali celých 84 dní liečby, zatiaľ čo iní začali s liečebným protokolom a následne zomreli na chorobu alebo boli kvôli komplikáciám eutanizovaní. Kritériami pre zaradenie boli odpovede týkajúce sa akejkoľvek mačky, ktorá podstúpila liečbu GS-441524 s podozrením na FIP, a ktorá absolvovala najmenej 84 dní liečby (bez ohľadu na výsledok), alebo ktorá začala liečbu a následne uhynula. Vylučovacími kritériami boli odpovede týkajúce sa pacientov, ktorí absolvovali <84 dní terapie (kvôli existencii polovičného protokolu trvania liečby), alebo ktorí nezodpovedali väčšinu otázok ankety.
Vyplnenie dotazníka trvalo majiteľom mačiek zhruba tridsať minút a otázky pozostávali z formátu s možnosťou výberu z viacerých odpovedí a formátu krátkych odpovedí. Niektoré otázky sa objavili na základe predchádzajúcich odpovedí v hierarchickom usporiadaní. Povolenie zdieľať a šíriť anketu bolo získané od správcov sociálnej skupiny, a bolo často zdieľané a uverejňované na všetkých spriaznených stránkach. Údaje z prieskumov boli zozbierané od 31. júla 2020 do 25. októbra 2020. Štúdiu schválil inštitucionálny kontrolný výbor Ohio State University (protokol č. 2021E0162).
Všetky údaje boli analyzované v Minitab verzie 19 (State College, PA, USA). Boli vypočítané deskriptívy a frekvencie pre všetky kategorické premenné. Základná popisná štatistika bola vypočítaná pre všetky spojité premenné. Na porovnanie rozdielov medzi skupinami sa použili dvojvzorkové t-testy alebo jednosmerné ANOVA s alfa nastaveným na 0,05 a 80% výkonu.
Výsledky
Charakteristiky vlastníka/pacienta
Počas obdobia štúdie bolo zozbieraných 411 ankiet, pričom 393 prípadov spĺňalo kritériá pre zaradenie a bol známy stav (živý vs. mŕtvy). Zostávajúcich 18 ankiet bolo neúplných pre získanie dostatočného množstva informácií. Z týchto 393 prípadov bolo 64,9% samcov (52,3% kastrovaných samcov a 12,6% intaktných samcov) a 35,1% samíc (25,9% sterilizovaných samíc a 9,2% intaktných samíc).
Väčšina majiteľov bola z USA (73,7%), ďalší najvyšší počet pochádzal z Kanady (6,6%) (tabuľka 1). Priemerný vek pri diagnostikovaní bol 1,65 roka (približne 1 rok a 8 mesiacov) so štandardnou odchýlkou 2,28 roka a rozsahom od 2 mesiacov do 18 rokov. Viac ako dve tretiny mačiek (67,2%) boli krížené plemená, dlhosrstých domácich alebo krátkosrstých domácich. Zostávajúcich 32,8% tvorila široká škála čistokrvných plemien, pričom najbežnejšie plemeno bolo hlásené ako siamské (5,6% všetkých mačiek) (tabuľka 2). To podporuje šestnásťročnú retrospektívnu štúdiu z roku 2006, ktorú uskutočnili Pesteanu-Somogyi a kol., ktorý zistil, že čistokrvné mačky majú významne väčšiu pravdepodobnosť diagnózy FIP [11]. Takmer jedna štvrtina majiteľov uviedla, že im veterinárny lekár priamo (14,5%) alebo nepriamo (12,0%) povedal o nelicencovanom GS-441524, zatiaľ čo 30,36% vlastníkov uviedlo, že informácie našli pri vlastnom online prieskume, a 23,21% uviedlo, že sa dozvedeli o terapii GS-441524 na webových stránkach skupín sociálnych sietí pre majiteľov mačiek s FIP (tabuľka 3).
Tabuľka 1: Krajina pôvodu respondentov prieskumu.
Krajina
Počet odpovedí
%
USA
289
73.72
Kanada
26
6.63
Veľká Británia
15
3.83
Taliansko
13
3.32
Bulharsko
8
2.04
Chorvátsko
4
1.02
Holandsko
4
1.02
Rumunsko
4
1.02
Austrália
3
0.77
Írsko
3
0.77
Čína
2
0.51
Nemecko
2
0.51
Hong Kong
2
0.51
Mexico
2
0.51
Nový Zéland
2
0.51
Poľsko
2
0.51
Portugalsko
2
0.51
Česká republika
1
0.26
Maďarsko
1
0.26
Malajzia
1
0.26
Peru
1
0.26
Srbsko
1
0.26
Singapur
1
0.26
Švédsko
1
0.26
Švajčiarsko
1
0.26
Turecko
1
0.26
Celkom
392
100%
Neuvedené
1
Tabuľka 2. Plemená mačiek liečených GS-441524.
Plemeno
Počet odpovedí
%
Zmiešané
264
67.18
Siamská mačka
22
5.6
Mainská mývalia
12
3.05
Bengálska mačka
11
2.8
Britská krátkosrstá
10
2.54
Sibírska mačka
9
2.29
Ragdoll
8
2.04
Devon Rex
7
1.78
Perzská
7
1.78
Ruská modrá
7
1.78
Škótska klapouchá
5
1.27
Sphynx
5
1.27
Birma
4
1.02
Exotická krátkosrstá
3
0.76
Himalájska mačka
2
0.51
Nórska lesná mačka
2
0.51
Snowshoe
2
0.51
Abesínska mačka
1
0.25
Balinézska mačka
1
0.25
Bombajská mačka
1
0.25
Barmská mačka
1
0.25
Lykoi
1
0.25
Mandalay (Bombay)
1
0.25
Munchkin
1
0.25
Ocicat
1
0.25
Orientálna krátkosrstá
1
0.25
Ragamuffin
1
0.25
Selkirk Rex
1
0.25
Singapura
1
0.25
Skookum
1
0.25
Celkom
393
100.0
Tabuľka3. Ako sa majitelia mačiek prvýkrát dozvedeli o existencii terapie GS-441524 pre FIP. Majitelia mohli uviesť viac ako jeden zdroj, takže celkový počet odpovedí je vyšší ako celkový počet respondentov.
Spôsob
Počet odpovedí
%
Internet, nie Facebook
119
30.36
Facebook
91
23.21
Veterinár (priamo)
57
14.54
Priateľ
56
14.29
Veterinár (nepriamo)
47
11.99
Záchranná stanica
12
3.06
Chovateľ
8
2.04
Konferencia
2
0.51
Zatiaľ čo väčšina majiteľov (291 odpovedí, 74,3%) uviedla, že mali aspoň nejakú pomoc od veterinára (zvyčajne išlo o pomoc s diagnostickým monitorovaním), iba 34 (8,7%) uviedlo, že sa im dostalo významej pomoci pri podávaní terapie od svojich veterinárnych lekárov, ako je pomoc. s injekciami liečiva alebo s perorálnym podaním zlúčeniny. Je nutné poznamenať, že 101 (25,7%) vlastníkov uviedlo, že okrem počiatočnej diagnostiky sa im nedostalo inej veterinárnej pomoci. Títo majitelia liečili mačku úplne sami, čo vyvoláva obavy o dobré životné podmienky zvierat, ak sú majitelia netrénovaní alebo neskúsení v oblasti injekčného podávania alebo zvládania rán po injekcii. Priemerné hlásené náklady u rôznych značiek na liečbu terapiou GS-441524 boli 4920 USD, so štandardnou odchýlkou 3115 USD a mediánom 4000 USD. Uvedené náklady sa pohybovali od najnižších 500 USD po najvyššie 21 000 USD.
Charakteristiky ochorenia
Väčšina majiteľov (224 odpovedí, 57,0%) uviedlo, že ich mačka mala známky efuzívnej („vlhkej“) FIP, často so zjavne viditeľnými výpotkami, spozorovanými majiteľmi. Veľký kontingent (169 odpovedí, 43,2%) majiteľov uvádzal príznaky neurologického a/alebo očného ochorenia. Najčastejšími klinickými príznakmi boli letargia/apatia (347 odpovedí, 88,3%), znížená chuť do jedla (308 odpovedí, 78,4%) a horúčka (258 odpovedí, 65,7%) (tabuľka 4).
Tabuľka 4. Klinické príznaky hlásené u mačiek liečených GS-441524. Majitelia mohli uviesť viac ako jednu odpoveď, takže celkový počet odpovedí je vyšší ako celkový počet respondentov.
Klinické príznaky
Počet odpovedí
%
Letargia/Malátnosť
347
88.3%
Nechutenstvo
308
78.4%
Strata hmotnosti
282
71.8%
Horúčka
258
65.7%
Odmietanie jedla (anorexia)
188
47.8%
Zväčšené brucho
167
42.5%
Skrývanie/Vyhýbanie
147
37.4%
Výpotok
116
29.5%
Obťažná chôdza
103
26.3%
Neurologické príznaky
103
26.3%
Dýchacie ťažkosti/kašeľ
95
24.2%
Žltačka
53
13.5%
Najčastejšími znakmi reakcie na terapiu boli zvýšená chuť do jedla (287 odpovedí, 73,8%), zlepšený pohyb/chôdza/skákanie (205 odpovedí, 52,7%), zlepšená energia (153 reakcií, 39,3%) a ústup horúčky (104 reakcií 26,7%). Medzi 50 mačkami, u ktorých došlo k relapsu (12,7%), sa u viac ako polovice (69,0%) vyvinuli zhoršujúce sa príznaky súvisiace s apetítom, letargiou, slabosťou a horúčkou. Ďalších 14,3% majiteľov pozorovalo neurologické alebo očné príznaky.
Charakteristiky liečby
Bolo hlásených mnoho rôznych nelicencovaných značiek liekov s obsahom GS-441524. Krajina pôvodu týchto zlúčenín nie je ľahko zistiteľná. Najčastejšie bol hlásený Mutian (19,4%), za ním nasledovali majitelia, ktorí počas liečby používali viacero rôznych značiek (18,1%), a to hlavne preto, že pôvodná značka už nebola k dispozícii, keď potrebovali znova objednať (tabuľka 5). Možno kvôli zmätku medzi respondentmi prieskumu ohľadne rozdielu v „dávkovaní“ (mg/kg) oproti „dávke“ (mg celkom) iba 203 majiteľov presne uvádzalo počiatočné a konečné dávkovanie pre ich mačky. Priemerné počiatočné dávkovanie bolo 6,7 mg/kg (rozsah 2 mg/kg až 16 mg/kg) so štandardnou odchýlkou 2,24 a mediánom 5 mg/kg a priemerné konečné dávkovanie bolo 8,5 mg/kg (rozsah 3 mg /kg až 25 mg/kg) so štandardnou odchýlkou 3,34 a mediánom 8 mg/kg. Počiatočné dávkovanie bolo voľne založené na predchádzajúcej štúdii z UC Davis [3] a majitelia hľadali pomoc u správcov webových stránok skupín na sociálnych sieťach pri individuálnych zmenách na základe reakcie pacienta a nedávnych laboratórnych nálezov. Je potrebné poznamenať, že počas liečebného obdobia nebolo údajne znížené žiadne dávkovanie. Pri použití párového t-testu bol rozdiel medzi počiatočným a konečným dávkovaním veľmi významný (p <0,001). Uvedené dávkovanie sa líši od štúdie z roku 2018, ktorá zistila, že optimálna dávka je 4,0 mg/kg subkutánne každých 24 hodín po dobu minimálne 12 týždňov [3]. Počiatočné a konečné dávkovania boli významne odlišné pre mačky s neurologickými alebo očnými príznakmi hlásenými vlastníkmi v porovnaní s mačkami, ktoré nemali neurologické alebo očné postihnutie (priemerné dávkovanie 8,01 mg/kg oproti 5,44 mg/kg na začiatku liečby; priemerné dávkovanie 10,47 mg/kg oproti 6,62 mg/kg na konci liečby).
Tabuľka 5. Hlásená značka GS-441524. Mnoho respondentov používalo počas liečby viac ako jednu značku.
Značka GS (Koncentrácia)
Počet odpovedí
%
Mutian (rôzne dávkovanie a formulácie)
76
19.13
Viac značiek *
71
18.11
Shire (15 mg/mL)
62
15.82
Capella (15 mg/mL)
38
9.69
Hero-Biely (17 mg/mL)
38
9.69
Iné *
36
9.18
Oscar (15 mg/mL)
32
8.16
Hero-Modrý (15 mg/mL)
20
5.1
Pine (15 mg/mL)
19
4.85
Celkom
392
100.00
Neuvedené
1
—
Z 393 pacientov bolo 348 (88,5%) liečených 12 týždňov (84 dní), pričom 45 pacientov (11,4%) absolvovalo predĺženú liečbu (v priemere 4 týždne liečby navyše). Predĺženie liečby bolo založené na základe toho, či došlo k úplnému ústupu príznakov na konci štandardných 12 týždňov terapie a nezahŕňa mačky, ktoré relapsovali počas alebo po fáze pozorovania. Väčšina pacientov (71,7%) bola liečená injekčným GS-441524, 8,2% dostalo perorálne formulácie a 20,1% dostalo kombináciu perorálnych a injekčných formulácií. Vrámci prieskumu bola zaznamenaná aj liečba inými liekmi a podporné terapie (tabuľka 6). Medzi najbežnejšie doplnkové terapie patril vitamín B1 alebo B12 (41,8%) a používanie steroidov (37,9%). Iba 8,2% majiteľov uviedlo, že používali gabapentín.
Tabuľka 6. Podporné terapie hlásené pre mačky liečené GS-441524. Majitelia mohli uviesť viac ako jednu odpoveď, takže celkový počet odpovedí je vyšší ako celkový počet respondentov.
Podporná terapia
Počet odpovedí
%
Vitamín B1 alebo B12
138
41.8%
Steroidy
125
37.9%
Iné vitamíny a doplnky
103
31.3%
Tekutiny (SQ or IV, nešpecifikované)
90
27.4%
Antibiotiká
74
22.4%
Svetelná terapia
39
11.9%
Prostriedky proti zvracaniu
36
11.1%
Stimulátory apetítu
34
10.3%
Gabapentín
27
8.2%
Majitelia väčšiny pacientov, ktorí dostávali injekcie, hlásili vokalizáciu v čase injekcie (309 odpovedí, 82,0%) a/alebo bolesť v mieste vpichu (287 odpovedí, 76,1%). Viac ako polovica (203 odpovedí, 51,7%) hlásila zjazvenie a chrasty v mieste (miestach) injekcie (tabuľka 7).
Tabuľka 7. Komplikácie a nežiaduce udalosti hlásené u mačiek liečených GS-441524. Majitelia mohli uviesť viac ako jednu odpoveď, takže celkový počet odpovedí je vyšší ako celkový počet respondentov.
Komplikácia
Počet odpovedí
%
Vokalizácia pri injekcii
309
82.0%
Bolesť v mieste injekcie
287
76.1%
Mačka bojovala počas aplikácie
236
62.6%
Chrasty/jazvy
203
51.7%
Lézie/rany v mieste aplikácie
157
42.2%
Krvácanie v mieste aplikácie
147
39.4%
Zvíšená aktivita
133
35.5%
Opuch v mieste aplikácie
96
25.7%
Zvýšený apetít
54
14.3%
Výsledky
V prípade mačiek, ktoré v čase prieskumu spĺňali kritériá zaradenia, žilo 380 (96,7%) a 13 (3,3%) zomrelo. Pokiaľ ide o aktuálnu fázu liečby, 54,0% bolo hlásených ako „vyliečených“, 43,3% bolo v období pozorovania (prežilo najmenej 12 týždňov liečby) a 2,7% bolo opäť liečených na relaps príznakov FIP. Medzi 224 mačkami so známkami efuzívnej („vlhkej“) FIP zomrelo osem mačiek (3,6% mačiek v tejto skupine) do času, keď vlastník vyplnil dotazník. Spomedzi 169 mačiek s neefúznou (suchou) FIP päť (2,96%) uhynulo do času vypĺňania dotazníka. Zo 169 mačiek, u ktorých boli hlásené neurologické alebo očné príznaky, zomrelo osem (4,7% mačiek v tejto skupine). Štyri z týchto mačiek, ktoré uhynuli, mali neurologické/očné, ako aj príznaky efuzívnej (vlhkej) FIP a štyri mačky, ktoré uhynuli, mali neurologické/očné, ako aj príznaky neefuzívnej (suchej) FIP. Rozdiel v úmrtnosti medzi týmito skupinami nebol štatisticky významný.
Väčšina majiteľov (88,2%) hlásila znateľné zlepšenie do jedného týždňa od začiatku liečby GS-441524 a priemerný čas „návratu k normálnemu správaniu“ bol 3,85 týždňa (rozsah 1 až 16 týždňov). Majitelia mačiek s neurologickými alebo očnými príznakmi uviedli, že 66% z nich reagovalo na liečbu do jedného týždňa a 16,3% týchto mačiek vykázalo výrazné zlepšenie do jedného dňa. Recidíva podozrenia na FIP (definovaná ako recidíva príznakov po skončení 12-týždňového obdobia liečby) bola hlásená v 50/393 prípadoch (12,7%), pričom 48 z týchto 50 majiteľov mačiek (96%) uviedlo iba jeden relaps. Päť mačiek (10%) s hláseným relapsom uhynulo alebo boli eutanizované, všetky po jednom relapse. Zo 45 mačiek (90%) s relapsom FIP, ktoré boli v čase prieskumu nažive, bolo v súčasnosti liečených 9, 17 bolo v 12-týždňovom období pozorovania a 19 bolo považovaných za vyliečené. Štyri (8%) z päťdesiatich mačiek s hláseným relapsom vykazovali v čase diagnostiky neurologické alebo očné príznaky; to nebol štatisticky významný rozdiel od počtu mačiek bez neurologických alebo očných znakov v čase diagnostiky.
Diskusia
Uvádzame prvú vedeckú správu o nelicencovanej antivírusovej terapii používanej na úspešnú domácu liečbu mačacej infekčnej peritonitídy (FIP) majiteľmi mačiek. Pokiaľ je autorom známe, je to prvé rozšírené použitie nelicencovaného liečiva skupinového pôvodu pre liečbu veterinárnej choroby. Neobhajujeme neoprávnené použitie tohto lieku; Našim cieľom bolo predložiť tieto informácie s cieľom lepšie informovať majiteľov mačiek a veterinárnych lekárov, ktorí stoja pred rozhodnutiami o liečbe suspektných prípadov FIP.
Samci boli v našej štúdii zastúpení nadpriemerne (64,9%), podobne ako predchádzajúce zistenia Riemera a kol. ktoré ukázali, že mužské pohlavie významne korelovalo s FIP [12]. Takmer tri štvrtiny (72,7%) vlastníkov, ktorí sa zúčastnili prieskumu, mali sídlo v USA. Čiastočne to môže byť spôsobené tým, že prieskum je napísaný v angličtine, a hoci je tu zameraná sociálna sieť medzinárodnou platformou, zdá sa, že členovia majú sídlo väčšinou v USA. Priemerný vek mačiek v našej štúdii bol jeden rok a osem mesiacov, čo zodpovedá Riemerovi a kol. (2016), ktorí zistili, že FIP sa významne častejšie vyskytuje u mačiek mladších ako dva roky [12]. Viac ako dve tretiny (67,2%) uvádzaných mačiek boli zmiešané plemená alebo domáce mačky, čo je o niečo menej, ako uvádza Riemer a kol. u mačiek s FIP v roku 2016 (78,8%) [12]. Prieskum zistil, že 32,8%mačiek liečených liekmi s GS-441524 bolo čistokrvných, pričom siamské (5,6%), maine coon (3,05%), bengálske (2,8%) a britská krátkosrstá (2,54%) boli najčastejšie uvádzané plemená. Nadmerné zastúpenie čistokrvných mačiek uvedené v našej štúdii môže byť spôsobené zvýšenou prevalenciou FIP, ako už skôr uviedli Pesteanu-Somogyi a kol. (2006) [11]; z dôvodu umiestnenia v prostredí s vyššou početnosťou mačiek; alebo možno kvôli tomu, že majitelia čistokrvných mačiek sú v priemere majetnejší a investujú viac financií do svojich mačiek.
Je zaujímavé, že približne jedna štvrtina (26%) majiteľov uviedla, že po diagnostikovaní FIP liečili svoje mačky úplne sami, bez pomoci alebo vedomia svojich veterinárnych lekárov. Je dôležité si uvedomiť, že hoci väčšina respondentov nášho prieskumu nedostala od svojich veterinárnych lekárov pomoc s terapiou, máme podozrenie, že veľká väčšina z nich dostala predpokladanú diagnózu FIP prostredníctvom veterinárneho lekára v podobe klinických a laboratórnych údajov (napríklad kompletný krvný obraz, biochémia, analýza tekutín, atď.), keďže ich vyžadujú správcovia skupín sociálnych sietí pred začatím terapie. Títo majitelia dokázali nájsť podporu potrebnú na administráciu terapie GS-441524 doma vďaka online pomoci skupín na sociálnych sieťach, najmä od správcov skupín. Iba 8,7% uviedlo, že ich veterinár im významne pomohol pri liečbe ich mačky GS-441524 tým, že pomohol podať zlúčeninu namiesto toho, aby ponúkol iba rutinné vyšetrenia a opakované diagnostické vyšetrenie. Väčšina majiteľov (65,6%) napriek tomu pokračovala so svojim veterinárom v starostlivosti, ktorá zvyčajne spočívala v opakovaní krvných testov a ďalšej diagnostike. Z našich výsledkov nie je jasné, aká časť tých, ktorí navštevovali svojich veterinárnych lekárov, informovala veterinárny tím o domácej liečbe GS-441524. Je známe, že správcovia skupín sledujú pokroky jednotlivých mačiek prostredníctvom protokolu o liečbe v tabuľke. Monitorujú rôzne parametre ako hmotnosť, hematokrit, počet bielych krviniek, počet lymfocytov, počet neutrofilov, počet monocytov, albumín, globulín, pomer A:G v sére (pomer albumín/globulín), celkový bilirubín, BUN (dusík močoviny v krvi), kreatinín a ALT (alanín transamináza). Na základe pokroku v mesačných hodnotách krvného obrazu sa majitelia môžu poradiť so svojim prideleným správcom vždy, keď ošetrujúci veterinárny lekár nemôže pomôcť, a to buď z dôvodu obmedzených znalostí o liečbe, alebo z neochoty pomôcť zo strachu pred rizikom straty lekárskej licencie. Toto zistenie prináša dôležité otázky o tom, či by administrátori v úsilí pomôcť pacientom s FIP mohli byť obvinení z výkonu veterinárnej medicíny bez licencie a mohli by nevedomky spôsobovať ujmu, prípadne, akú úlohu by v tomto úsilí mohli a mali mať veterinári.
Počiatočné neoficiálne správy od majiteľoch získavajúcich tento liek z nelicencovaných zdrojov v zúfalstve, aby pomohli svojim chorým mačkám, prišli s fámami o cene 10 000 – 20 000 USD a niektorí z našich respondentov prieskumu uviedli, že tieto ceny zaplatili. Napriek tomu, že je to určite stále nákladná liečba, majitelia v našom prieskume uviedli priemerné náklady tesne pod 5 000 USD (4920 USD). Tento rozdiel môže byť čiastočne spôsobený nárastom spoločností vyrábajúcich tento nelicencovaný liek, čo znižuje náklady prostredníctvom konkurencie. Máme podozrenie, že náklady na liečbu sa z tohto dôvodu časom znížili, ale nemôžeme to definitívne určiť, pretože náš prieskum sa nedotazoval na kalendárny dátum terapie.
Mutian, medzinárodná značka a pravdepodobne najznámejšia dostupná formulácia GS-441524, neuvádza GS-441524 na svojom štítku a namiesto toho je uvádzaný ako „doplnok stravy“ na liečbu FIP [13]. Toto však bola značka GS-441524, ktorú najčastejšie uviedli majitelia, čo naznačuje, že majitelia aj správcovia webových stránok sa domnievajú, že táto značka obsahuje liek GS-441524. Majitelia, ktorí sa zúčastnili prieskumu, uviedli vyššie počiatočné dávky, ako boli uvedené v pôvodnej štúdii (4,0 mg/kg) [3], a ešte vyššie konečné dávky, pravdepodobne na základe reakcie ich mačky na liečbu. Priemerné počiatočné dávkovanie bolo 6,7 mg/kg a priemerné konečné dávkovanie bolo 8,5 mg/kg; tento rozdiel bol štatisticky významný (p <0,001). Majitelia mačiek, ktoré vykazovali neurologické alebo očné príznaky FIP, boli správcami skupín inštruovaní, aby začali s vyššími dávkami (8 mg/kg). Nie je jasné, či je táto prax opodstatnená, na základe nedostatku publikovaných dôkazov o použití terapie GS-441524 pri neurologickej alebo okulárnej FIP, okrem jedinej kazuistiky očného ochorenia, ktoré bolo liečené 8 mg/kg Mutian a simultánne mačacím interferónom omega [14]. Mačkám, u ktorých bola pôvodne diagnostikovaná neneurologická/neokulárna FIP, a u ktorých sa neskôr objavili neurologické alebo očné príznaky, bolo tiež odporučené zvýšiť dávkovanie. Mnoho majiteľov tiež zvýšilo dávkovanie, ak sa ich mačka v časovom bode 4 alebo 8 týždňov nedosiahla výrazné zlepšenie, teda mala A:G 0,5 alebo nižší. Podľa našich zistení sa niektorí majitelia rozhodli začať najskôr na spodnom konci dávkovacieho rozmedzia, aby zistili, či to bude postačovať na liečbu klinických príznakov ich mačiek, najmä kvôli obavám z nákladov. Pôvodné štúdie na GS-441524 pre FIP uvádzali menší úspech pri liečbe FIP u mačiek začínajúcich na 2,0 mg/kg a určili optimálne dávkovanie 4,0 mg/kg podávanú subkutánne každých 24 hodín [3]. Rozdiel v účinnom dávkovaní medzi kontrolovanou štúdiou od UC Davis [3] a tým, ktoré uviedli majitelia v našej štúdii, ktorí získali nelicencovanú terapiu podobnú GS-441524, môže byť spôsobený nedostatočnou kontrolou kvality od rôznych čiernych výrobcov. Je možné, že nelicencované formulácie obsahujú menej čistú zlúčeninu alebo sú inak menej účinné ako zlúčenina farmaceutickej kvality. Preto je náročné porovnať tieto dávkovania priamo.
Na základe pôvodného liečebného protokolu použitého v štúdii UC Davis je odporúčaná dĺžka liečby 84 dní (12 týždňov) [3]. Z našich pozorovaní na stránkach skupín je rozhodnutie ukončiť liečbu a začať 84-dňové (12-týždňové) obdobie pozorovania založené nielen na úplnom ústupe klinických príznakov hlásených majiteľom (s výnimkami pri minoritných zvyškových okulárnych alebo neurologických príznakov), ale aj v 12. týždni krvných testov preukazujúcich normalizáciu hladín sérových bielkovín. Dobrovoľný veterinárny lekár na stránke sociálnych sietí často preskúma krvné testy týchto majiteľov a schváli ukončenie terapie GS-441524. Aj keď sa zdá, že niektoré mačky dosahujú klinickú remisiu oveľa skôr, ako o 12-týždňov, majitelia a správcovia webových stránok sa zdráhajú prerušiť liečbu skôr ako za 12 týždňov zo strachu, že mačka relapsuje. Liečebné kúry kratšie ako 12 týždňov ešte neboli formálne vyhodnotené. Žiadny respondent prieskumu v našej štúdii neuviedol predčasné (<12 týždňov) ukončenie terapie, okrem prípadov, keď mačka zomrela alebo bola eutanizovaná.
Protokol vytvorený správcami sociálnych skupín odporúča všetkým majiteľom, aby začali s liečbou injekčnou formou lieku s obsahom GS-441524. Považuje sa to za lepšie kvôli obavám z enterálnej absorpcie liekov u mačiek s gastrointestinálnymi príznakmi (vracanie, hnačka) alebo anorexiou. Po dvoch až štyroch týždňoch injekčnej liečby sa mačky prehodnocujú prípad od prípadu, aby sa zistilo, či môžu prejsť na perorálnu formuláciu. Pri oboch formách lieku existujú problémy s kompatibilitou pacienta. Koncentrácia zlúčeniny v orálnom prípravku je nízka, čo vyžaduje podanie viacerých kapsúl naraz, čo môže byť pre majiteľov náročné. Aj keď je jednoduchšie zaistiť, aby pacient dostal celú dávku v injekčnej forme, pH 1,5 požadované na udržanie lieku v stabilnom stave [3] je veľmi kyslé, čo pravdepodobne vedie k bolesti a vokalizácii po injekcii. Väčšina majiteľov v našom prieskume (71,7%) uviedla, že používa iba injekčnú formu GS-441524, zatiaľ čo iba 8,2% uviedlo, že používa iba perorálnu formuláciu. Pravdepodobne kvôli kyslej povahe injekčnej formy väčšina pacientov (89% z tých, ktorí dostávali injekcie) vokalizovala po injekcii, a pre väčšinu (83% z tých, ktorí dostávali injekcie) bola aplikácia bolestivá v mieste (miestach) injekcie. Bolesť a chorobnosť spojená s miestom vpichu predstavovali väčšinu hlásených nežiaducich účinkov lieku. U mnohých mačiek (46% z tých, ktorí dostávali injekcie) sa vyvinuli vredy alebo rany v predchádzajúcich miestach vpichu a u 43% mačiek (z tých, ktoré dostávali injekcie) bolo hlásené krvácanie v mieste vpichu.
Injekčné a perorálne formy vitamínu B1 alebo vitamínu B12 boli najčastejšie uvádzanou podpornou terapiou používanou vlastníkmi. Išlo pravdepodobne o pomoc mačkám, ktoré boli anemické, mali gastrointestinálne príznaky a/alebo mali anorexiu [15]. Okrem hematologických účinkov vitamín B12 ovplyvňuje ďalšie telesné systémy, ako sú neurologické a kardiovaskulárne systémy, a môže pomôcť pri prevencii chorôb u ľudí [16], ktoré by u mačiek s podozrením na FIP bolo možné použiť terapeuticky alebo profylakticky. Nie je prekvapením, že druhou najčastejšou doplnkovou terapiou bolo podávanie steroidov (pravdepodobne glukokortikoid; v prieskume sa neuvádza), ktoré sú tradične súčasťou štandardnej starostlivosti o FIP [17]. Boli hlásené rôzne nutraceutiká a ako podporná starostlivosť sa bežne používala buď subkutánna alebo intravenózna tekutinová terapia (27,4%, náš výskum nerozlišuje). Časté používanie antibiotík (predpokladá sa v dôsledku rán/abscesov v mieste vpichu, profylaktické použitie v dôsledku neutropénie alebo na iné empirické použitie) vyvoláva vážne obavy z toho, ako sa tieto lieky získavali a či sa dodržiavala primeraná antimikrobiálna manipulácia. Je zaujímavé, že „svetelnú terapiu“ (známu aj ako fotobiomodulácia) používalo 11,9% vlastníkov. Táto terapia sa príležitostne používa vo veterinárnej medicíne ako alternatívna metóda na liečbu zápalových stavov, poskytovanie analgézie a na urýchlenie hojenia rán [18,19]. Existuje podozrenie, že svetelná terapia sa používala väčšinou na liečbu rán, ktoré sa vyvinuli v dôsledku injekčnej formy liečby. Kontrola bolesti nebola hlásená tak často, ako sa očakávalo. NSAID (nesteroidné protizápalové lieky) boli spomenuté zriedkavo, pravdepodobne kvôli súbežnému užívaniu steroidov. Gabapentín uviedlo iba 8,2% majiteľov a tento liek mohol byť použitý buď na sedáciu/chemické obmedzenie pacienta, alebo na analgéziu.
Z predložených údajov sme považovali za najpozoruhodnejší počet mačiek, ktoré údajne dobre reagovali na liečbu a v čase prieskumu ich majitelia uviedli, že sú v úplnej klinickej remisii (bez klinických príznakov, ktoré boli predtým spojené s diagnózou FIP). Len malé percento pokračovalo v liečbe kvôli relapsu (2,7%), ktorý je definovaný ako recidíva klinických príznakov, ktoré vedú k diagnóze FIP alebo vzniku nových klinických príznakov FIP. To platilo pre rôzne klinické prejavy FIP, vrátane efuzívnej, neefuzívnej, okulárnej a neurologickej FIP. Takmer všetky (96,7%) mačky boli nažive v čase, keď ich majitelia odoslali dotazník. Predtým sa verilo, že zatiaľ čo GS-441524 sa ukazuje ako účinná liečba efuzívnych a neefuzívnych foriem FIP, okulárne a neurologické formy sú oveľa ťažšie liečiteľné kvôli neschopnosti GS441524 prejsť hematookulárnou alebo hematoencefalickou bariérou [2]. Okrem toho predchádzajúce merania GS-441524 vo vzorkách komorovej vody a mozgovomiechovej tekutiny (CSF) ukázali podstatne nižšie koncentrácie ako vzorky séra po subkutánnych injekciách GS-441524 [2]. V našej štúdii 42,3% majiteľov uviedlo, že ich mačka má neurologické alebo očné príznaky a iba 4,7% týchto mačiek údajne neprežilo. Aj keď je v tejto oblasti potrebný ďalší výskum, naša štúdia poskytuje dôkaz, že terapia GS-441524 je možnosťou aj pre týchto pacientov. Dôvodom môže byť to, že počiatočné aj konečné dávkovania mačiek v tejto skupine liečených doma ich majiteľmi boli podstatne vyššie ako pôvodne publikované dávkovania [3].
Vzhľadom na množstvo rôznych nelicencovaných značiek antivírusových liekov s GS-441524 a množstvo vlastníkov, ktorí počas liečby používali viacero značiek, naša štúdia nebola schopná zistiť, či je jedna značka účinnejšia ako druhá. To bolo umocnené skutočnosťou, že väčšina mačiek v štúdii bola v čase písania textu nažive, čo naznačuje veľmi vysokú účinnosť väčšiny, ak nie všetkých, nelicencovaných značkiek GS-441524. Aj keď uznávame inherentnú zaujatosť v tejto štúdii, napriek nedostatku dohľadu nad výrobou liekov s GS-441524 sa zdá, že je veľmi úspešný pri liečbe FIP podľa údajov uvádzaných vlastníkmi. Napriek tomu je rozumné sa domnievať, že tieto rôzne formulácie sa môžu líšiť v koncentrácii, čistote, pH, účinnosti, absorpčnom vzore, vedľajších účinkoch a ďalších charakteristikách, čo z nich robí cenný základ ďalšej štúdie. Upozorňujeme, že nemôžeme priamo potvrdiť, že ktorákoľvek z tu uvedených značiek obsahuje akúkoľvek zlúčeninu podobnú GS-441524; toto je dôležitá oblasť aktívneho vyšetrovania našej skupiny a ďalších. Je stále možné, že niektoré z týchto značiek obsahujú iné antivirotiká na báze nukleozidových analógov, proteázový inhibítor GC376 [20] alebo niečo úplne iné.
Jedno zrejmé obmedzenie našej štúdie je, že neexistuje žiadny konečný antemortem diagnostický test na infekčnú peritonitídu mačiek (mimo invazívnej chirurgie a biopsie, ktorá sa vykonáva veľmi zriedka), a respondenti nášho prieskumu sa sami vybrali tak, aby sa pripojili k sociálnym skupinám FIP a reagovali na náš prieskum. Preto, hoci bolo hlásených 380 z 393 mačiek, ktorých majitelia sa zúčastnili prieskumu, nažive, neexistuje spôsob, ako potvrdiť diagnózu FIP u týchto mačiek alebo u 13 uhynutých mačiek, pretože neboli hlásené žiadne pitvy. Nepochybne niektorí z týchto pacientov mohli byť nesprávne diagnostikovaní a ich majitelia nesprávne nasmerovaní na liečbu GS-441524. Pozitívna odpoveď na terapiu teda mohla byť u niektorých pacientov iba zhodou okolností. Podobne prípady, u ktorých bolo hlásené, že nereagujú dobre na terapiu podobnú GS-441524 (t.j. 13 mačiek, ktoré zomreli v tejto štúdii), mohli byť preto, že pacient skutočne trpel inou chorobou. Vzhľadom na náklady na túto liečbu a veľké ťažkosti spojené s jej získaním je však opodstatnené predpokladať, že u mnohých pacientov už bola väčšina ostatných spôsobov diagnostiky a terapie vykonaná a vyčerpaná, a že FIP bola skutočne najpravdepodobnejšou diferenciálnou diagnózou. Je potrebné poznamenať, že zatiaľ čo v súčasnosti neexistuje jediný, minimálne invazívny, definitívny diagnostický test na FIP, reakcia na liečbu GS-441524 by sa dala považovať za podpornú alebo dokonca diagnostickú metódu FIP. Väčšina majiteľov (88,2%) uviedla dramatické zlepšenie klinických príznakov do jedného týždňa od začiatku liečby s priemerným časom „návratu k normálnemu správaniu“ 3,85 týždňa. Preto by v budúcnosti mačky s podozrením na FIP mohli začať s liečbou GS-441524 a rýchla reakcia na lieky by mohla byť užitočná diagnosticky aj terapeuticky. Je však dôležité zaistiť kontinuálne hodnotenie renálnych a hepatálnych funkcií, pretože nukleozidové analógy môžu byť nefrotoxické aj hepatotoxické [21].
V súvislosti s vyššie uvedeným obmedzením pravdepodobne výberová odchýlka zohrala veľkú úlohu v zjavnom úspechu terapie v našej štúdii. Prieskum bol rozoslaný na hlavnej stránke podpornej FIP skupiny, ako aj na stránkach pre mačky, ktoré boli považované buď za „vyliečené“, s relapsom a predĺženou liečbou, trpiace neurologickou a očnou FIP, alebo trpiace efuzívnou (vlhkou) FIP. Odpovede na prieskum boli vyžiadané od majiteľov, ktorých mačky absolvovali najmenej 12 týždňov liečby. Aj keď sa tým splnil náš cieľ získať informácie od používateľov internetu o nelicencovaných liekoch GS-441524, výsledky vykazujú nepochybne určitú zaujatosť oproti majiteľom, ktorých mačky začali s liečbou GS-441524, ale následne zomreli na FIP, pretože možno opustili skupiny alebo sa rozhodli nevyplniť prieskum z dôvodu negatívnych emočných stavov vrátane nedostatku nadšenia z neúspešnej liečby. Je rozumné predpokladať, že títo majitelia sa s väčšou pravdepodobnosťou odídu zo skupiny, potom ako svoju mačku stratili kvôli chorobe, alebo že algoritmus webových stránok skupín im tieto príspevky nemusí zobrazovať tak často. Tento efekt ešte zhoršuje skutočnosť, že pôvodná webová stránka FIP skupiny bola prevádzovateľom sociálnej siete odstránená v auguste 2020. Zostávajúcich členov skupiny pravdepodobne postihne „zaujatie nadšením“, pričom iba tí najnadšenejší a najpozitívnejší členovia skupiny zostávajú. Tieto faktory veľmi pravdepodobne zvýšili úspešnosť tu uvádzanú; Nedávna štúdia v Číne však zistila podobné, veľmi vysoké prežitie u mačiek liečených GS-441524 a GC376 (29/30 mačiek klinicky vyliečených) [22]. Tieto údaje o výsledkoch hlásených vlastníkmi by sa preto mali považovať za predbežné a je naliehavo potrebný ďalší výskum skutočnej účinnosti terapie GS-441524 v poľných podmienkach.
K ďalším obmedzeniam štúdie patrí, že dokončenie ankety trvalo asi 30 minút, pričom v tomto bode mohli byť majitelia unavení z odpovedí na otázky. V otázkach, ktoré poskytovali dlhé zoznamy možných odpovedí, mohla zohrať významnú úlohu aj zaujatosť [23]. Okrem toho spoliehanie sa na to, že si majitelia (s neznámym lekárskym vzdelaním) budú pamätať na udalosti stresujúceho obdobia pri starostlivosti o chorú mačku, môže viesť k nepresnostiam pri spomínaní. Čiastočne kvôli týmto problémom naša skupina pokračuje v prebiehajúcej prospektívnej analýze nelicencovanej terapie podobnej GS-441524 pre FIP. Napriek tomu tu poskytnuté údaje poukazujú na bezprecedentnú udalosť vo veterinárnej medicíne a zo skúseností týchto majiteľov sa možno zmysluplne poučiť.
Je dôležité, že hoci je GS-441524 štrukturálne veľmi podobný remdesiviru a existuje dobrý dôvod domnievať sa, že môže byť účinný proti iným koronavírusom, žiadny respondent prieskumu neuviedol používanie nelicencovaných prípravkov GS-441524 určených pre mačky pri liečbe ľudí so SARS-CoV-2. To bolo mierne prekvapujúce vzhľadom na to, že rovnaké zúfalstvo z liečby FIP u mačiek, ktoré viedlo k rozvoju čierneho terapeutického trhu s GS-441524, je možné nájsť u miliónov rodín na celom svete s milovanou osobou trpiacou na COVID- 19 počas obdobia trvania prieskumu. Nemáme však žiadne informácie o takom použití, ani z našich údajov z prieskumov, ani z neoficiálneho monitorovania týchto FIP skupín. Z regulačného hľadiska by neoprávnené používanie liekov s GS-441524 u ľudí pravdepodobne znamenalo vyššiu úroveň právneho záujmu.
Závery
Aj keď ide o nekonvenčnú a určite nie bez zdravotných a právnych rizík, nelicencovanú, domácu terapiu s GS-441524, podľa majiteľov účinne rieši klinické príznaky u mačiek s podozrením na FIP. Podľa údajov uvádzaných vlastníkmi je táto nelicencovaná liečba očividne účinná pri rôznych klinických prejavoch ochorenia (efuzívna, neefuzívna, neurologická a očná forma FIP). Budúcnosť tohto konkrétneho lieku na liečbu FIP je nejasná, pretože stav výroby, distribúcie a patentových práv GS-441524 sa neustále vyvíja. Táto liečba však predstavuje testovací prípad sociálnych médií a entít pochádzajúcich z davu, ktoré povstávajú, aby vyplnili prázdnotu, ktorú zanechalo korporačné odmietnutie „zázračného lieku“ na predtým 100% smrteľnú chorobu. Jedna sa o prvý takto rozsiahly prípad vo veterinárnej medicíne, ale v dnešnej dobe vysoko prepojeného internetu takmer určite nebude posledný.
Referencie
Frediansyah, A.; Nainu, F.; Dhama, K.; Mudatsir, M.; Harapan, H. Remdesivir and its antiviral activity against COVID-19: A systematic review. Clin. Epidemiol. Glob. Health2021, 9, 123–127. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Murphy, B.G.; Perron, M.; Murakami, E.; Bauer, K.; Park, Y.; Eckstrand, C.; Liepnieks, M.; Pedersen, N.C. The nucleoside analog GS-441524 strongly inhibits feline infectious peritonitis (FIP) virus in tissue culture and experimental cat infection studies. Vet. Microbiol.2018, 219, 226–233. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Pedersen, N.C.; Perron, M.; Bannasch, M.; Montgomery, E.; Murakami, E.; Liepnieks, M.; Liu, H. Efficacy and safety of the nucleoside analog GS-441524 for treatment of cats with naturally occurring feline infectious peritonitis. J. Feline Med. Surg.2019, 21, 271–281. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Pubchem. PubChem Compound Summary for CID 44468216 [Internet]. National Center for Biotechnology Information. 2021. Available online: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/gs-441524 (accessed on 28 May 2021).
Pedersen, N.C. An update on feline infectious peritonitis: Virology and immunopathogenesis. Vet. J.2014, 201, 123–132. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Drechsler, Y.; Alcaraz, A.; Bossong, F.J.; Collisson, E.W.; Diniz, P.P.V. Feline coronavirus in multicat environments. Vet. Clin. N. Am. Small Anim. Pract.2011, 41, 1133–1169. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Ettinger, S.J.; Feldman, E.C.; Cote, E. Textbook of Veterinary Internal Medicine—eBook; Elsevier Health Sciences: Amsterdam, The Netherlands, 2017. [Google Scholar]
Lewis, C.S.; Porter, E.; Matthews, D.; Kipar, A.; Tasker, S.; Helps, C.R.; Siddell, S.G. Genotyping coronaviruses associated with feline infectious peritonitis. J. Gen. Virol.2015, 96, 1358–1368. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Addie, D.D.; Jarrett, O. Use of a reverse-transcriptase polymerase chain reaction for monitoring the shedding of feline coronavirus by healthy cats. Vet. Rec.2001, 148, 649–653. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Pedersen, N.C. An update on feline infectious peritonitis: Diagnostics and therapeutics. Vet. J.2014, 201, 133–141. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Pesteanu-Somogyi, L.D.; Radzai, C.; Pressler, B.M. Prevalence of feline infectious peritonitis in specific cat breeds. J. Feline Med. Surg.2006, 8, 1–5. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Riemer, F.; Kuehner, K.A.; Ritz, S.; Sauter-Louis, C.; Hartmann, K. Clinical and laboratory features of cats with feline infectious peritonitis—A retrospective study of 231 confirmed cases (2000–2010). J. Feline Med. Surg.2016, 18, 348–356. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
MUTIAN. Cat FIP Symptoms & Treatment: Free Online Support. Available online: https:/www.mutian.us/ (accessed on 1 March 2021).
Addie, D.D.; Covell-Ritchie, J.; Jarrett, O.; Fosbery, M. Rapid Resolution of Non-Effusive Feline Infectious Peritonitis Uveitis with an Oral Adenosine Nucleoside Analogue and Feline Interferon Omega. Viruses2020, 12, 1216. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Maunder, C.L.; Day, M.J.; Hibbert, A.; Steiner, J.M.; Suchodolski, J.S.; Hall, E.J. Serum cobalamin concentrations in cats with gastrointestinal signs: Correlation with histopathological findings and duration of clinical signs. J. Feline Med. Surg.2012, 14, 686–693. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
O’Leary, F.; Samman, S. Vitamin B12 in health and disease. Nutrients2010, 2, 299–316. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Hartmann, K.; Ritz, S. Treatment of cats with feline infectious peritonitis. Vet. Immunol. Immunopathol.2008, 123, 172–175. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Venter, M. Light therapy in veterinary practice. Vet. Nurs. J.2013, 28, 320–323. [Google Scholar]
Pedersen, N.C.; Kim, Y.; Liu, H.; Galasiti Kankanamalage, A.C.; Eckstrand, C.; Groutas, W.C.; Bannasch, M.; Meadows, J.M.; Chang, K.-O. Efficacy of a 3C-like protease inhibitor in treating various forms of acquired feline infectious peritonitis. J. Feline Med. Surg.2018, 20, 378–392. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Fan, Q.; Zhang, B.; Ma, J.; Zhang, S. Safety profile of the antiviral drug remdesivir: An update. Biomed. Pharmacother.2020, 130, 110532. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Yin, Y.; Li, T.; Wang, C.; Liu, X.; Ouyang, H.; Ji, W.; Liu, J.; Liao, X.; Li, J.; Hu, C. A retrospective study of clinical and laboratory features and treatment on cats highly suspected of feline infectious peritonitis in Wuhan, China. Sci. Rep.2021, 11, 5208. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
Koppell, J.G.; Steen, J.A. The Effects of Ballot Position on Election Outcomes. J. Politics2004, 66, 267–281. [Google Scholar] [CrossRef]
EO fungujú ako antibakteriálne, antivírusové, protiplesňové a insekticídne látky.
TEO preukázal účinnosť proti niekoľkým RNA vírusom vrátane CoV.
Protiinfekčná aktivita TEO proti FCoV sa hodnotila v bunkách CRFK.
Ukázalo sa, že TEO inhibuje replikáciu FCoV in vitro.
TEO vykazoval virucidnú aktivitu proti FCoV až 92,86%.
Abstrakt
Mačací infekčný zápal pobrušnice (FIP) je smrteľné systémové ochorenie mačiek spôsobené koronavírusom (CoV) (FIPV). Napriek klinickému významu a vplyvu na zdravie mačiek sú v súčasnosti terapeutické možnosti liečby FIP u mačiek obmedzené. Výskyt pandemického koronavírusu ťažkého respiračného syndrómu typu 2 (SARS-CoV-2), etiologického agens koronavírusovej choroby z roku 2019 (COVID-19), schopného infikovať široké spektrum druhov zvierat vrátane mačiek, vyvolali záujem o vývoj nových molekúl s antivírusovou aktivitou na liečbu infekcií CoV u ľudí a zvierat.
Esenciálne oleje (EO) vzbudili významnú pozornosť svojimi antivírusovým vlastnosťami, ktoré integrujú a v niektorých prípadoch nahrádzajú bežné lieky. Je známe, že Thymus vulgaris EO (TEO) je účinný proti niekoľkým RNA vírusom vrátane CoV. V predloženej štúdii sa antivírusová účinnosť TEO proti FIPV hodnotila in vitro.
TEO v koncentrácii 27μg/ml bol schopný inhibovať replikáciu vírusu s významným znížením o 2 log10 TCID50/50 μl. Okrem toho bola virucidná aktivita testovaná pomocou TEO pri koncentrácii 27 a 270 μg/ml, nad cytotoxickým prahom, na stanovenie zníženia vírusového titra až na 3,25 log10 TCID50/50 μl do 1 hodiny časového kontaktu. Tieto výsledky otvárajú niekoľko perspektív z hľadiska budúcich aplikácií a terapeutických možností pre koronavírusy, keďže FIPV infekcia u mačiek by mohla byť potenciálnym modelom pre štúdium antivirotík proti CoV.
Pandémia koronavírusovej choroby z roku 2019 (COVID-19) spôsobená koronavírusom ťažkého repiračného syndrómu (SARS-CoV-2) (WHO, 2020) podnietila výskum liečby a imunitnej profylaxie s využitím predošlých poznatky zhromaždených o SARS-CoV-1 a živočíšnych CoV (Decaro a kol., 2020). Doteraz nebol schválený žiadny konkrétny liek na liečbu pacientov s COVID-19. Remdesivir, inhibítor RNA-dependentnej RNA polymerázy (RdRp), však preukázal sľubné výsledky (Kabir a kol., 2020). Okrem toho v súčasnosti prebiehajú štúdie na vyhodnotenie účinnosti teikoplanínu a monoklonálnych a polyklonálnych protilátok proti SARS-CoV-2 (Kabir a kol., 2020).
Lieky skúmané u mačiek na liečbu mačacej infekčnej peritonitídy (FIP) boli tiež testované proti COVID-19 u ľudských pacientov (Pedersen a kol., 2018, Pedersen a kol., 2019).
Koronavírusy sú dlho známe práve kvôli existencii FIP, smrteľného systémové ochorenia mačiek. Vírus FIP (FIPV) je virulentný patotyp mačacieho enterického koronavírusu (FCoV) (Kummrow a kol., 2005). Napriek jeho vplyvu na zdravie mačiek sú terapeutické možnosti liečby FIP u mačiek obmedzené a účinné vakcíny nie sú k dispozícii. Okrem toho boli hlásené nepriaznivé účinky vakcín (Tizard, 2020). Vývoj nových molekúl s antivírusovou aktivitou na liečbu infekcií CoV je v súčasnosti vnímaný ako priorita v humánnej aj v živočíšnej medicíne. Infekcia FIPV u mačiek sa považuje za potenciálny model pre štúdium antivirotík proti CoV (Amirian a Levy, 2020).
Rastlinné lieky podnietili záujem spotrebiteľov i vedcov (Hosseinzadeh a kol., 2015) a éterické oleje (EO) extrahované z aromatických a liečivých rastlín zvýšili osobitnú pozornosť pre ich prospešné vlastnosti (de Sousa Barros a kol., 2015). Uvádza sa, že EO vykazujú významné antiseptické, antibakteriálne, antivírusové, antioxidačné, antiparazitárne, protiplesňové a insekticídne účinky (Chouhan a kol., 2017; Ma a Yao, 2020). Nedávno u sumcov experimentálne intoxikovaných Thiamethoxamom (TMX) podávanie EO Thymus vulgaris (TEO) čiastočne znížilo toxické účinky TMX (El Euony a kol., 2020). EO sú tiež potenciálnym rezervoárom inovatívnych terapeutických riešení, ktoré integrujú a v niektorých prípadoch nahrádzajú konvenčné lieky (Reichling a kol., 2009). Napríklad EO Laurus nobilis (Vavrín pravý – Vavřín vznešený) inhiboval SARS CoV typu 1 (SARS-CoV-1) (Loizzo a kol., 2008) a zmes EO bola účinná proti vírusu vtáčej koronavírusovej infekčnej bronchitídy (IBV) (Jackwood et al., 2010). ). Nedávno sa tiež ukázalo, že EO vykazujú antivírusovú aktivitu proti SARS-CoV-2 (Asif a kol., 2020). Ukázalo sa, že TEO je účinný proti niekoľkým RNA vírusom vrátane CoV (Lelešius a kol., 2019; Nadi a kol., 2020).
Zloženie TEO (Specchiasol Bussolengo, Verona – Taliansko) sa stanovilo v troch nezávislých experimentoch pomocou plynovej chromatografie technikou hmotnostnej spektrometrie (GC-MS) (Rosato a kol., 2020). Podrobnosti o príprave vzoriek, prístrojoch a metódach analýzy GC-MS už boli publikované (Salvagno a kol., 2020; Rosato a kol., 2018). Dáta z GC/MS analýz boli vyjadrené ako % plochy ± Modelovanie štruktúrnych rovníc (SEM). Vo všetkých prípadoch bol SEM nižší ako 10%. Štatistická analýza pre SEM bola vykonaná pomocou programu Microsoft Excel Office 2010 (Windows 7 Home Premium, Microsoft Corporation, USA). Celkovo bolo vo vzorke TEO identifikovaných 26 zložiek, čo zodpovedá 98,7% celej zmesi. Podrobné chemické zloženie TEO je uvedené v doplnkovej tabuľke 1.
TEO v koncentrácii 928 mg/ml sa najskôr zriedil v dimetylsulfoxide (DMSO; Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) a následne v Dulbecco-MEM (D-MEM).
Mačacie obličkove bunky Crandell Reese (CRFK) sa kultivovali v DMEM a kmeni FCoV-II 25/92 (Buonavoglia a kol., 1995) s titrom 105.25 TCID50/50 μl.
Cytotoxicita TEO sa hodnotila pomocou testu XTT (Denizot a Lang, 1986) s použitím súpravy In Vitro Toxicology Assay Kit (Sigma – Aldrich Srl, Miláno, Taliansko) po vystavení buniek rôznym koncentráciám zlúčenín (7.25, 14.5, 29, 58, 116, 232, 464, 928, 1856 μg/ml) počas 72 hodín. Cytotoxicita sa vyhodnocovala spektrofotometrickým meraním absorpčného signálu (optická hustota, OD). Vo všetkých experimentoch boli neošetrené bunky použité ako negatívna kontrola pri 0% cytotoxicite. Ako kontrola vehikula sa použili bunky ošetrené ekvivalentnými riedeniami DMSO. Po logaritmickej konverzii koncentrácií TEO sa údaje získané v testoch cytotoxicity analyzovali pomocou postupu nelineárnej úpravy krivky. Správnosť zhody sa testovala nelineárnou regresnou analýzou krivky dávka-odozva. Maximálna necytotoxická koncentrácia sa považovala za koncentráciu zlúčeniny, pri ktorej životaschopnosť ošetrených buniek CRFK poklesla o nie viac ako 20% (CC20) vzhľadom na negatívnu kontrolu.
Hodnota CC20 TEO bola vyhodnocovaná pri 27μg/ml a vypočítaná na základe priemeru ± štandardná odchýlka (SD) z troch experimentov. Vo všetkých experimentoch DMSO nepreukázal žiadny účinok na bunky.
Na základe výsledkov testu cytotoxicity sa antivírusová aktivita TEO proti kmeňu FCoV-II 25/92 vyhodnocovala pri 27μg/ml a tiež pod cytotoxickým prahom (13,5 μg/ml). Použitie látky pod cytotoxickým prahom nám umožňuje znížiť toxicitu a dosiahnuť efektívne výsledky pri nižších nákladoch. Konfluentné monovrstvy CRFK buniek 24h na 24-jamkových platniach boli infikované 100µl FCoV-II obsahujúceho 10000 TCID50 s multiplicitou infekcie (MOI) 0,14. Po adsorpcii vírusu počas 1 hodiny pri 37°C sa očkovacie látky odstránili, bunkové monovrstvy sa raz premyli a pridal sa TEO. V neošetrených infikovaných bunkách sa použil D-MEM na nahradenie inokula a použil sa ako vírusová kontrola. Po 72 hodinách sa odobrali alikvóty supernatantov na vírusovú titráciu (Lanave a kol., 2019) a kvantifikáciu RNA (Gut a kol., 1999).
Virucidná aktivita TEO proti FCoV-II sa hodnotila predbežnou liečbou vírusu (10000 TCID50) pomocou TEO v koncentrácii 27μg/ml a nad cytotoxickým prahom (270μg/ml), pretože ak sa použije ako virucid, molekula nie je v priamom kontakte s bunkami. Konkrétne bolo 100µl FCoV-II ošetrených TEO (1 ml) pri izbovej teplote. Na experimenty sa použila vírusová kontrola. Po 10 minútach, 30 minútach a 1 hodine sa alikvotné podiely každej zmesi vírusu-TEO a vírusovej kontroly podrobili vírusovej titrácii (Lanave et al., 2019).
Údaje z testov antivírusovej a virucidnej aktivity boli vyjadrené ako priemer ± SD a analyzované analýzou odchýlky (ANOVA) pomocou Tukeyho testu ako post hoc testu (štatistická významnosť stanovená na 0,05).
Štatistické analýzy sa uskutočňovali pomocou softvéru GraphPad Prism v.8.0.0 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA).
Vírusové titre infikovaných buniek CRFK ošetrených TEO a neošetrených infikovaných buniek (vírusová kontrola) sa vyjadrili ako log10 TCID50/50 ul a vyniesli sa proti koncentráciám liečiva. Porovnaním vírusového titra neošetrených infikovaných buniek (4,25 log10 TCID50/50 μl) s infikovanými bunkami ošetrenými TEO v koncentrácii 13,5 a 27μg/ml došlo k poklesu o 0,25 (p> 0,05) a 2,25 log10 TCID50/50 μl (p < 0,0001), v danom poradí (obr. 1A). To naznačuje, že TEO v koncentrácii 27μg/ml je schopný významne inhibovať replikáciu vírusu. Antivírusová aktivita TEO proti FIPV korešponduje s výsledkami získanými s hydrosolmi Thymus vulgaris in vitro proti vírusu reprodukčného a respiračného syndrómu ošípaných (PRRSV) (Kaewprom a kol., 2017).
Obrázok 1. Vírusové titre supernatantov odobratých 72 hodín po infekcii z neošetrených CRFK buniek infikovaných FCoV (10 TCID50) a ošetrených éterickým olejom Thymus vulgaris (TEO) v rôznych koncentráciách (13,5 a 27μg/ml). 0=Neošetrené CRFK bunky infikovanée FCoV, NA=Nukleová kyselina
Vírusové titre sa hodnotili metódou zriedenia endpointu, vyjadrili sa ako log10 TCID50/50 μl a vyniesli sa proti TEO pri rôznych koncentráciách (A). Vírusové nukleové kyseliny boli kvantifikované pomocou qPCR, vyjadrené ako log10 vírusových NA/10ul a vynesené proti TEO pri rôznych koncentráciách (B). Pruhy na obrázkoch označujú priemery. Chybové pruhy označujú štandardnú odchýlku.
Vírusové nukleové kyseliny (NA) sa vyjadrili ako log10 vírusových NA/10μl infikovaných buniek ošetrených TEO a vírusovou kontrolou a vyniesli sa proti necytotoxickým koncentráciám liečia. Porovnaním vírusovej nálože neošetrených infikovaných buniek (6,53 log10 vírusových NA/10μl) s infikovanými bunkami ošetrenými TEO pri 13,5 a 27 μg/ml bol zaznamenaný pokles o 0,61 (p = 0,0005) a 1,34 (p <0,0001) log10 NAs /10 μl, v danom poradí (obrázok 1B).
Virucidná aktivita TEO bola vyhodnocovaná pri rôznych koncentráciách a pre rôzne doby kontaktu s FCoV-II (obr. 2). Po 10 minútach TEO pri 27 a 270μg/ml sa zistilo zníženie o 1,5 (p = 0,0008) a 2,5 (p <0,0001) log10 TCID50/50μl v porovnaní s vírusovou kontrolou (4,25 log10 TCID50/50 μl) (Obr. 2A). Po 30 minútach TEO pri 27 a 270 μg/ml indukoval pokles o 1,25 (p = 0,0007) a 3,375 (p <0,0001) log10 TCID50/50 μl v porovnaní s vírusovou kontrolou (3,75 log10 TCID50/50 μl) (Obr. 2B). Po 1 hodine TEO pri 27 a 270μg/ml došlo k poklesu o 1,25 (p = 0,0007) a 3,25 (p <0,0001) log10 TCID50/50μl v porovnaní s vírusovou kontrolou (3,50 log10 TCID50/50μl). K vírusovej inaktivácii došlo v závislosti na dávke a čase, počínajúc od 33,33% a dosahujúcou 92,86%, keď sa TEO použil v najvyššej koncentrácii (270 μg/ml), po 1 hodine (obr. 2C). Virucidnú aktivitu TEO možno vysvetliť schopnosťou poškodiť vírusový obal, čím sa zabráni adsorpcii a penetrácii do hostiteľských buniek (Reichling a akol., 2009), ako ukázala elektrónová mikroskopia u obalu herpesvírusu po predbežnej liečbe EO (Shogan a kol., 2006). TEO by preto mohol byť cenným prostriedkom na dezinfekciu povrchov a mohol by byť prísadou pri príprave potravinových výrobkov.
Obrázok 2. Virucidný účinok TEO pri rôznych koncentráciách (27 a 270 μg/ml) proti FCoV (10000 TCID50). Vírus bol inkubovaný s TEO počas 10 minút (A), 30 minút (B) a 60 minút (C) pri izbovej teplote a následne titrovaný v CRFK bunkách. Vírusové titre FCoV boli vyjadrené ako log10 TCID50/50 μl a vynesené proti TEO pri rôznych koncentráciách. Pruhy na obrázkoch označujú priemery. Chybové pruhy označujú štandardnú odchýlku.
Thymus vulgaris je aromatická rastlina stredomorského pôvodu, ktorá obsahuje EO a lipofilné látky (Nabavi a kol., 2015) a jej extrakty sú bohaté na tymol, karvakrol, p-cymén a γ-terpinén (Kowalczyk a kol., 2020).
Thymus vulgaris preukázal antivírusovú aktivitu proti herpes simplex vírusu (HSV) (Nolkemper a kol., 2006), chrípkovému vírusu (Vimalanathan a Hudson, 2014), vírusu Newcastleskej choroy (Rezatofighi a kol., 2014), PRRSV (Kaewprom a kol., 2017) a IBV (Lelešius a kol., 2019), aj keď antivírusový mechanizmus ešte treba objasniť. Naopak, bola už objasnená inhibícia replikácie vírusu ľudskej imunodeficiencie in vitro pomocou TEO (Feriotto a kol., 2018).
Chemické zloženie TEO odhalilo prítomnosť 26 molekúl, z ktorých hlavnými frakciami boli tymol, p-cymén, γ-terpinén, β-linalool, karyofylén. Aby sa znížila cytotoxicita TEO, bolo by zaujímavé identifikovať aktívne molekuly a testovať ich jednotlivo. Ako sa dalo očakávať, hlavnú zložku TEO použitú v tejto štúdii predstavoval tymol. Dokázalo sa, že tymolová frakcia má účinnosť proti HSV (Sharifi-Rad a kol., 2017) a chrípkovým vírusom (Alburn a kol., 1972). Mali by sa testovať ďalšie menej zastúpené frakcie TEO, aby sa vyhodnotila ich antivírusová aktivita.
Demonštrovali sme in vitro antivírusový a virucidný účinok TEO proti FCoV v bunkách CRFK. Tieto štúdie otvárajú niekoľko perspektív z hľadiska budúcich aplikácií a terapeutických možností pre ľudské a zvieracie koronavírusy.
Prehlásenie o konflikte záujmov
Autori prehlasujú, že nedošlo ku konfliktu záujmov.
Dodatok A. Doplňujúce údaje
Tabuľka 1: Chemické zloženie éterického oleja Thymus vulgaris
C. Buonavoglia, P. Sagazio, F. Cirone, M. Tempesta, F. Marsilio
Isolamento e caratterizzazione di uno stipite di virus della peritonite infettiva felina [Isolation and characterization of a feline infectious peritonitis strain]
Modulatory role of dietary Thymus vulgaris essential oil and Bacillus subtilis against thiamethoxam-induced hepatorenal damage, oxidative stress, and immunotoxicity in African catfish (Clarias garipenus)
G. Feriotto, N. Marchetti, V. Costa, S. Beninati, F. Tagliati, C. Mischiati
Chemical composition of essential oils from Thymus vulgaris, Cymbopogon citratus, and Rosmarinus officinalis, and their effects on the HIV-1 Tat protein function
J. Sharifi-Rad, B. Salehi, P. Schnitzler, S.A. Ayatollahi, F. Kobarfard, M. Fathi, M. Eisazadeh, M. Sharifi-Rad
Susceptibility of herpes simplex virus type 1 to monoterpenes thymol, carvacrol, p-cymene and essential oils of Sinapis arvensis L., Lallemantia royleana Benth. and Pulicaria vulgaris Gaertn
A. de Sousa Barros, S.M. de Morais, P.A.T. Ferreira, Í.G.P. Vieira, A.A. Craveiro, R.O. dos Santos Fontenelle, J.E.S.A. de Menezes, F.W.F. da Silva, H.A. de Sousa
Chemical composition and functional properties of essential oils from Mentha species
SK 
EN